[发明专利]一种酶制剂，制备方法及其在降解苏丹红上的应用

权利要求书

1.一种酶制剂，其特征在于，该酶制剂包含分子量为50-85KD的蛋白酶；

所述的酶制剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）将微生物菌种单色云芝Coriolus unicolor置于斜面培养基活化后置于无菌操作环境下，用接种针划取0.5 cm×0.5 cm的菌块接种于预先设有种子培养基的摇瓶中，置于转速为120 r/min的恒温振荡器中，在28℃下恒温培养4天，得到种子液；

（2）将种子液转入含有发酵培养基的摇瓶中，在转速为120 r/min的恒温振荡器中，28℃下恒温培养7天；将培养好的发酵液离心10 min收集菌丝体；

（3）用50 mM磷酸缓冲液清洗菌丝体后再在液氮下研磨至均一粉末，收集菌丝体粉末，加入50 mM磷酸缓冲液，置于10000 rpm冷冻离心机中4℃离心10 min后取上清液即为粗酶液；然后在上清液中加入硫酸铵至终浓度为40% wt，在4℃下放置24 h后置于10000 rpm冷冻离心机中4℃离心10 min，所得沉淀即为酶制剂。

2.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于，所述的分子量为50-85KD的蛋白酶中包括多酚氧化酶，所述的多酚氧化酶为分子量为55KD的蛋白酶。

3.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于，所述步骤（1）中的斜面培养基为马铃薯琼脂培养基，即将200 g/L的去皮土豆浆液与20 g/L的葡萄糖和20 g/L琼脂经热溶混匀制得，pH自然。

4.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于，所述步骤（1）中的种子培养基为马铃薯液体培养基，即将200 g/L的去皮土豆浆液与20 g/L的葡萄糖经混合后制得，pH自然。

5.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于，所述步骤（2）中的发酵培养基为马铃薯基础培养基，即将200 g/L的去皮土豆浆液与20 g/L的葡萄糖，3 g/L KH₂PO₄，1.5 g/L MgSO₄·7H₂O和微量维生素B1经混合后制得，pH 6.0。

6.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于，所述步骤（3）中的菌丝体粉末与磷酸缓冲液的添加体积比为，菌丝体粉末/磷酸缓冲液=1/1.5。

7.权利要求1中所述的微生物菌种单色云芝在降解苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV中的一种或多种上的应用。

8.权利要求1-6任一项所述的酶制剂在降解苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV中的一种或多种上的应用。