[发明专利]裸鼹鼠VEGFA基因特异性检测引物及检测试剂盒

权利要求书

1.一种裸鼹鼠VEGFA基因特异性检测引物，其特征在于，所述的检测引物为VEGFA基因Real-timePCR检测引物：

正向引物如SEQIDNO:1所示，

反向引物如SEQIDNO:2所示。

2.一种裸鼹鼠VEGFA基因的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒包括VEGFA基因Real-timePCR检测引物：

正向引物如SEQIDNO:1所示，

反向引物如SEQIDNO:2所示。

3.根据权利要求2所述的裸鼹鼠VEGFA基因的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒还包括：

PremixExTaq^TM；

50×ROXReferenceDye。

4.根据权利要求2所述的裸鼹鼠VEGFA基因的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒包括：

正向引物如SEQIDNO:1所示，2OD；

反向引物如SEQIDNO:2所示，2OD；

PremixExTaq^TM，5000μl；

50×ROXReferenceDye，200μl；

灭菌蒸馏水，适量。

5.一种裸鼹鼠VEGFA基因的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括如下步骤：

提取细胞的总mRNA，然后反转录成cDNA，以此cDNA为模板，利用VEGFA基因的Real-timePCR检测引物进行荧光定量PCR反应，引物序列如下：

正向引物如SEQIDNO:1所示；

反向引物如SEQIDNO:2所示。

6.根据权利要求5所述的裸鼹鼠VEGFA基因的检测方法，其特征在于，具体检测步骤为：

A.提取细胞或者组织中总RNA：

采用TRIZOL法提取细胞或组织中总RNA，并采用反转录试剂盒反转录为cDNA；

B.制备Real-timePCR检测反应体系10μl：

将步骤A中cDNA溶液稀释10倍后取1μl，PremixExTaq^TM5μl，PCR正向引物稀释为10μM浓度后取0.2μl，PCR反向引物稀释为10μM浓度后取0.2μl，50×ROXReferenceDye0.2μl，灭菌蒸馏水3.4μl；设置阴性对照；

C.进行PCR反应，反应程序如下：

保温阶段95℃30s；循环阶段95℃5s，60℃34s，72℃30s，40个循环；溶解曲线阶段95℃15s，60℃1min，95℃15s。