[发明专利]一种微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂盒的制备有效
申请号: | 201510613673.9 | 申请日: | 2015-09-24 |
公开(公告)号: | CN105296599B | 公开(公告)日: | 2020-01-03 |
发明(设计)人: | 张进威;王讯;罗毅;王鹏俊;李明洲 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12Q1/61 | 分类号: | C12Q1/61 |
代理公司: | 51228 成都君合集专利代理事务所(普通合伙) | 代理人: | 张鸣洁 |
地址: | 611131 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 微量 高效 稳定 脂肪 细胞内 甘油 检测 试剂盒 制备 | ||
1.一种微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂,其特征在于,该试剂为质量浓度为1mg/ml尼罗红工作液;
所述尼罗红工作液的溶质为尼罗红粉末;
溶剂为丙酮和DMSO构成的混合液,所述溶剂中丙酮含量为20%,DMSO含量为80%。
2.一种微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:前脂肪细胞分化到实验所需的时间点后,将孔板取出培养箱,小心吸去培养液,使用PBS溶液清洗两次,注意不要损坏底层细胞;
步骤2:清洗后,每孔加入对应量的PBS溶液;
步骤3:加入与孔板对应量的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂,室温避光孵育5min;
步骤4:将孔板置于酶标仪中,设置激发波长/发射波长=485nm/572nm;
检测荧光强度;
步骤5:用荧光显微镜拍照;
当孔板的孔数为6个时,清洗孔使用的PBS溶液为2ml,清洗后,孔板中加入的PBS溶液为5ml,最后孔板中加入的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂140ml;
当孔板的孔数为12个时,清洗孔使用的PBS溶液为1ml,清洗后,孔板中加入的PBS溶液为2ml,最后孔板中加入的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂60ml;
当孔板的孔数为24个时,清洗孔使用的PBS溶液为1ml,清洗后,孔板中加入的PBS溶液为1ml,最后孔板中加入的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂30ml;
当孔板的孔数为48个时,清洗孔使用的PBS溶液为0.4ml,清洗后,孔板中加入的PBS溶液为0.4ml,最后孔板中加入的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂12ml;
当孔板的孔数为96个时,清洗孔使用的PBS溶液为0.2ml,清洗后,孔板中加入的PBS溶液为0.2ml,最后孔板中加入的权利要求1所述的微量、高效、稳定的脂肪细胞内甘油三酯检测试剂5ml.。
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