[发明专利]宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法。

背景技术

水蛭，俗称为蚂蝗，其基源是水蛭科动物宽体金钱蛭(WhitmaniapigraWhitman)、日本医蛭(HirudonipponicaWhitman)或柳叶蚂蝗(WhitmaniaacranulataWhitman)的干燥全体，在中国药典(2010)中有记载^[1]，其中宽体金线蛭(Whitmaniapigra)是目前国内中药材市场上销售的主要商品，其味苦咸腥、性平，有小毒，具有破血、逐瘀、通经之功效，广泛被应用于临床治疗。野生宽体金线蛭广泛分布于长江中下游地区及山东、河北、东北等地，历史上是以自然捕捞为主作为药材商品。近年来，以水蛭为原料的药品及保健品日渐增多，但因农药、化肥等滥用，及工农业“三废”对环境的污染，野生自然资源锐减，随着水蛭药用价值的深度开发，其市场需求量增大。因此，有关宽体金线蛭的人工养殖探索逐步展开，规模也逐年增大。然而，不同养殖产地的水蛭药材质量差异较大，严重影响其临床疗效^[2]。宽体金线蛭是一种非吸血型水蛭，体内不含天然的水蛭素。迄今为止，有关宽体金线蛭的有效药用成分研究报道比较少，特别是抗凝物质的序列至今未见报道^[4]。吕丹等^[5]对山东微山湖产的宽体金钱蛭的生化成分进行了分析，认为其独特的脂肪酸和氨基酸组成特点或许是其高药用价值的重要依据之一。

油酸属于单不饱和脂肪酸，对血液总胆固醇和有害胆固醇有明显降低的作用，却不降低有益胆固醇，因此在预防心血管疾病方面发挥有效作用。宽体金线蛭中油酸(18∶1)的含量在脂肪酸中的含量次高。目前对不同产地或中药材市场的宽体金线蛭的优劣没有一个有效的评判方法，色谱指纹图谱可以表征物质包含化学成分的综合信息，可以通过图谱特性判断样品质量优劣。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法，获得不同产地或中药材市场的宽体金线蛭油酸的气相色相指纹图谱，图谱可以表征物质包含化学成分的综合信息，可以根据图谱特性来判断样品质量优劣。对宽体金线蛭的优劣提供一个有效的评判方法宽体，对金线蛭的人工养殖和药材质量评价体系的建立提供客观参考。

本发明提供的技术方案为：

一种宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法，该方法包括以下步骤：

a)对照品溶液制备：取600mg自制现榨花生油，加15％三氟化硼甲醇溶液进行甲脂化，再将脂化后的溶液置于萃取仪中，用加入萃取剂萃取30min，即得对照品溶液；

b)待测溶液制备：称取宽体金线蛭油酸干样品5g，加入100mg焦性没食子酸、2mL十一碳酸甘油三酯内标溶液、2mL乙醇和10mL盐酸溶液混合均匀，再进行加热水解得到水解溶液，将水解溶液置于分液漏斗中，加入提取溶剂振摇后静置15min，然后挥发提取溶剂，得到宽体金线蛭油酸的脂肪提取物，将得到的宽体金线蛭油酸的脂肪提取物加三氟化硼溶液进行脂化，再将脂化后的溶液置于萃取仪中，用萃取剂萃取30min，即得待测溶液；

c)气相色谱指纹图谱测定：设定气相色谱条件，取1μL步骤a)中的对照品溶液置于气相色谱仪中，在设定的气相色谱条件下测定对照品气相色谱指纹图谱，取1μL步骤b)中待测溶液照品溶液置于气相色谱仪中，在同样的气相色谱条件下测定待测品气相色谱指纹图谱。

优选的是，在所述的宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法中，所述步骤a)中甲脂化的过程中要进行加热，加热温度为80～85℃。

优选的是，在所述的宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法中，所述步骤a)中的萃取剂为正庚烷。

优选的是，在所述的宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法中，所述步骤b)中加热水解的温度为70～80℃。

优选的是，在所述的宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法中，所述步骤b)中挥发提取溶剂为乙醚石油醚混合液，萃取剂为正庚烷。

优选的是，在所述的宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱检测方法中，所述步骤c)中气相色谱条件为：色谱分析柱为DB-WAX(30m×0.32mm×0.25μm)；载气为氮气，其压强为40KPa，氢气为30KPa，空气为400KPa；气化室温度为270℃；检测器(FID)温度为280℃，升温程序：柱温130℃，保持5min，以3℃/min速率升至230℃，保持10min。