[发明专利]猪圆环病毒2型CAP抗原制备方法在审
| 申请号： | 201510618251.0 | 申请日： | 2015-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN105087606A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 郭慧娟;吕茂杰;杨保收;付旭彬;梁武 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/34 | 分类号： | C12N15/34;C12N15/866;C07K14/01;C07K1/34 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 李明卓 |
| 地址： | 300308 天津市滨海新区空港*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 圆环 病毒 cap 抗原 制备 方法 | ||
1.猪圆环病毒2型CAP抗原制备方法，其特征在于该方法是将猪圆环病毒2型CAP蛋白表达基因整合到质粒上得到重组质粒，而后将所述重组质粒利用杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型CAP蛋白。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述猪圆环病毒2型CAP蛋白表达基因是在猪圆环病毒2型CAP蛋白天然表达基因基础上，以杆状病毒偏嗜密码子替换其中的杆状病毒非偏嗜密码子所修饰后的基因。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述猪圆环病毒2型CAP蛋白表达基因，其核苷酸序列如SEQIDNO2所示。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述杆状病毒表达系统是flashBAC杆状病毒表达系统。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述杆状病毒表达系统以sf9昆虫细胞作为宿主细胞。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述质粒是杆状病毒转移载体pOET3。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述猪圆环病毒2型CAP蛋白表达基因是利用BamHI和XhoI双酶切方法获得的。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于得到重组质粒后，将所述重组质粒利用脂质体转染法导入宿主细胞表达猪圆环病毒2型CAP蛋白。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于将重组质粒利用杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型CAP蛋白后，取宿主细胞培养液上清冻融，而后通过60～80KD菲托滤板去除细胞碎片，再通过4～6KD滤膜浓缩，再离心浓缩，即得到所述猪圆环病毒2型CAP抗原。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于所述离心浓缩是先以80000～120000g的速度超速离心，取沉淀，重悬，而后以20～40％蔗糖密度梯度、130000～170000g的速度超速离心，取中间层即得到所述猪圆环病毒2型CAP抗原。
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