[发明专利]人NEFL基因rs1059111位点多态性检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种测定人NEFL基因rs1059111位点多态性的方法，包括：

提供待测人基因组DNA；

提供扩增人NEFL基因rs1059111位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C；

以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含GWCGAC片段或WCGA片段的扩增产物，其中W为人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基A或T；

提供限制性内切酶；

利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及

根据所得酶切产物来确定人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基W是A还是T，

其中，限制性内切酶为仅能够切开GTCGAC片段与GACGAC片段之一的限制性内切酶，或为仅能够切开TCGA或ACGA片段之一的限制性内切酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所得扩增产物上，下游引物的错配碱基C与多态位点W的互补碱基之间相隔一个碱基G。

3.根据权利要求2所述的方法，其中在所得扩增产物上，下游引物末端碱基与多态位点W的互补碱基相邻。

4.根据权利要求1所述的方法，其中限制性内切酶为仅能切开GTCGAC片段的SalI、HincII、AccI或其同裂酶。

5.根据权利要求1所述的方法，其中限制性内切酶为能切开TCGA片段的Taq^αI或其同裂酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所得酶切产物包括三种片段类型：具有总片段长度的未切断扩增产物、切断后具有较长片段的扩增产物以及切断后具有较短片段的扩增产物，通过判断酶切产物所包含的片段类型来确定人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基W是A还是T。

7.根据权利要求6所述的方法，其中判断酶切产物所包含的片段类型是通过凝胶电泳联合紫外灯拍照后与参照图对比来进行的。

8.根据权利要求7所述的方法，其中参照图是扩增产物在凝胶电泳标准设定时间后经紫外灯拍照后而得且仅具有第一参照图像位置和第二参照图像位置，其中第一参照图像位置针对的是未切断的总片段长度的扩增产物，而第二参照图像位置则针对的是切断后具有较长片段的扩增产物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中通过设计上游引物和下游引物的长度而使得扩增产物的总片段长度在100至300bp之间，并且下游引物的片段长度至少为35bp，使得酶切切掉部分片段占总片段的长度的百分比超过20％。

10.一种用于测定人NEFL基因rs1059111位点多态性的试剂盒，其包含：

用于PCR扩增人NEFL基因rs1059111位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C以获得含GWCGAC片段或WCGA片段的扩增产物，其中W为人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基A或T；以及

仅能够切开GTCGAC片段与GACGAC片段之一的限制性内切酶，或为仅能够切开TCGA或ACGA片段之一的限制性内切酶。