[发明专利]人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法及应用

权利要求书

1.一种人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、样品前处理：

按体积比量取血清样品0.15～0.25份,体积为m，溶于0.45～0.75份的提取试剂中，混匀定容，体积为V，控温0℃～-4℃，经离心机离心沉底，分层；分离得到上清液，于-18℃～-25℃条件下冷冻一段时间，再取出控温0℃～-4℃，用离心机再次离心沉底，分层；再次分离所得上清液过0.22μm～0.45μm的有机系滤膜，所得滤液即为样品待测液；

所述提取试剂的制备方法为：按体积比量取甲醇2.5～3.5份、乙腈1.5～2.5份和N,N-二甲基甲酰胺0.5～1.5份，混合置于容器内，-18℃～-25℃密闭保存，用时摇匀；

S2、表面增强激光拉曼光谱检测：

样品待测液中依次加入表面增强试剂、无机盐凝聚剂，再用激光拉曼光谱仪扫描，根据1002cm^-1±3cm^-1对应峰的强度，从标准曲线上查出对应的乙酰苯丙氨酸含量为c，所述c的单位为mg/L，将所述m、V、c按式(I)计算，

X=c×Vm---(I)]]>

得到X，所述X的单位为mg/L,即为血清样品中乙酰苯丙氨酸的含量。

2.根据权利要求1所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于所述步骤S1中，血清样品与提取试剂采用涡旋混匀，-18℃～-25℃条件下冷冻10分钟，离心机10000转/分钟，每次离心3分钟。

3.根据权利要求1所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于所述步骤S1中，所述有机系滤膜为尼龙滤膜。

4.根据权利要求1所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于所述提取试剂的制备方法中，混合后液体于-18℃～-25℃保存24小时。

5.根据权利要求1所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于所述步骤S2中，表面增强试剂为金纳米溶胶，无机盐凝聚剂为氯化钠溶液。

6.根据权利要求5所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于，按体积比，0.1份样品待测液中依次加入0.3份金纳米溶胶、0.1份氯化钠溶液。

7.根据权利要求1所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法，其特征在于，所述步骤S2中，标准曲线的绘制方法为：

A、乙酰苯丙氨酸标准溶液配制：准确称取乙酰苯丙氨酸标准品10mg于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，根据血清样品中的浓度范围进行适当稀释，制成不同浓度的系列标准溶液；

B、将制得的系列标准溶液中依次加入表面增强试剂、无机盐凝聚剂，加入量与样品待测液的加入量相同，再分别用激光拉曼光谱仪扫描，记录1002cm^-1±3cm^-1对应峰的强度，将标准溶液的浓度与其对应峰强度制成标准曲线。

8.如权利要求1-7中任意一项所述的人体血清中乙酰苯丙氨酸的快速检测方法的应用，其特征在于，用于肝癌患者血清中乙酰苯丙氨酸含量的测定。