[发明专利]一种采用HPLC法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法

权利要求书

1.一种采用HPLC方法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备对照品溶液

称取柠檬酸对照品，加水制成浓度为1.70-1.73mg·ml^-1的溶液，即得；

(2)制备供试品溶液

称取桑葚药材样品，配制成浓度为15-25mg·ml^-1的水溶液，加热回流提取0.5-1.5h；即得；

(3)色谱条件

所述的色谱条件为：色谱柱为Kromasil C18，其规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相：0.6％的磷酸水溶液，检测器：紫外，检测波长：209nm，流速：0.5mL·min^-1，柱温：30℃，进样量10μl；

(4)测试

所述测试包括两步，第一步绘制标准曲线，包括如下步骤：将所述的对照品溶液稀释成浓度范围为0.1-2.0mg·mL^-1的待测对照品溶液5-7个，按照上述色谱条件，分别测定待测对照品溶液以及对照品溶液的峰面积，然后以峰面积为纵坐标，柠檬酸的质量浓度为横坐标进行线性回归，得到回归方程；

第二步测定供试品溶液，按照上述色谱条件，测定供试品溶液的峰面积，根据回归方程，得到供试品溶液的柠檬酸含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，称取桑葚药材样品之前，先将样品粉末过4号筛。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，加热回流提取1h。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的待测对照品溶液的浓度分别为0.10320、0.17200、0.34400、0.68800、1.37600mg·ml^-1。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述回归方程为y＝1278680x+1614，相关系数r为0.9999。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备对照品溶液

称取柠檬酸对照品，配制成浓度为17.2000mg·ml^-1的水溶液，超声并摇匀，过滤，取过滤液，即得对照品溶液；

(2)制备供试品溶液

将桑葚药品粉末过4号筛，配制成浓度为15-25mg·ml^-1，加热回流提取1h，过滤，取过滤液，即得供试品溶液；

(3)色谱条件

色谱柱为Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.6％的磷酸水溶液，检测器：紫外，检测波长：209nm，流速：0.5mL·min^-1，柱温：30℃，进样量10μl；

(4)测试

所述测试包括两步，第一步绘制标准曲线，包括如下步骤：将所述的对照品溶液稀释成浓度分别为0.10320、0.17200、0.34400、0.68800、1.37600mg·ml^-1的5个待测对照品溶液，按照上述色谱条件，分别测定5个待测对照品溶液以及浓度为1.72000mg·ml^-1的对照品溶液的峰面积，然后以峰面积为纵坐标，柠檬酸的质量浓度为横坐标进行线性回归，得到回归方程y＝1278680x+1614，相关系数r为0.9999；

第二步测定供试品溶液，按照上述色谱条件，测定供试品溶液的峰面积，根据回归方程，得到供试品溶液的柠檬酸含量。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述浓度为20-22mg·ml^-1。