[发明专利]一种采用HPLC法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药质量检测领域，尤其涉及一种HPLC法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法。

背景技术

桑椹，又名桑椹子、桑果、桑子、是桑科桑属mulberry(Morus alba L.)植物的果实。本属植物全球约有16种，分布于北温带、亚洲热带和非洲热带及美洲地区。我国约有11种，分布于全国大部分地区，以江苏、浙江等南方养蚕地区产量较大。1993年国家卫生部把桑椹列为“既是食品又是药品”的农产品之一。

桑椹中含有丰富的糖类、有机酸、脂类、维生素、色素、非色素酚和矿物质等成分。目前，在桑椹营养成分的研究的基础上，国内外对桑椹中功效成分的研究较多，主要集中在桑椹色素、非色素酚、及多糖等成分上。柠檬酸是其中含量较高的有机酸，柠檬酸又名枸橼酸，易溶于水，其具广泛的药理作用：1)柠檬能防止心血管动脉硬化并减少血液粘稠度；2)中国中医认为，柠檬性温、味苦、无毒，具有止渴生津、祛暑安胎、疏滞、健胃、止痛等功能利尿，调剂血管通透性；3)柠檬酸热量低，且具有很强的收缩性，因此有利于减少脂肪，是减肥良药；4)具有防止和消除皮肤色素沉着的作用；5)祛痰作用等。因此，建立起一种准确测量桑椹药材中柠檬酸含量的方法对于桑葚药材的质量控制具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用HPLC方法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法，包括如下步骤：

(1)制备对照品溶液

称取柠檬酸对照品，加水制成浓度为1.70-1.73mg·ml^-1的溶液，即得；

(2)制备供试品溶液

称取桑葚药材样品，配制成浓度为15-25mg·ml^-1的水溶液，即得；

(3)色谱条件

色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为0.1％-1.0％的磷酸水溶液；

(4)测试

所述测试包括两步，第一步绘制标准曲线，包括如下步骤：将所述的对照品溶液稀释成浓度范围为0.1-2.0mg·mL^-1的待测对照品溶液5-7个，按照上述色谱条件，分别测定待测对照品溶液以及对照品溶液的峰面积，然后以峰面积为纵坐标，柠檬酸的质量浓度为横坐标进行线性回归，得到回归方程；

第二步测定供试品溶液，按照上述色谱条件，测定供试品溶液的峰面积，根据回归方程，得到供试品溶液的柠檬酸含量。

作为本发明优选的方案，所述的色谱条件为采用Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相为0.6％的磷酸水溶液。

发明人考察了1.0％醋酸与0.6％磷酸2种系统梯度洗脱及其不同流动相比例，比较的磷酸浓度有0.1％，0.3％，0.6％，1.0％水溶液。结果表明，各种流动相中0.6％磷酸水溶液系统为最佳，其图谱上各个色谱峰的分离度较好，保留时间适中。

作为本发明更加优选的方案，所述的色谱条件还包括：采用紫外检测器，检测波长为200-240nm，流速：0.3-1.5ml·min^-1；柱温：25-40℃；进样量5-20μl。

作为本发明最优选的方案，所述的色谱条件为：色谱柱为Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：0.6％的磷酸水溶液，检测器：紫外，检测波长：209nm，流速：0.5mL·min^-1，柱温：30℃，进样量10μl。

发明人同时比较了不同柱温与流速的影响，柱温超过30℃分析时间缩短，但大多数色谱峰分离度小或不能分开；流速低于0.5ml·min^-1，分析时间过长，高于0.5ml·min^-1大多数色谱峰分离度差。因此选择便于控制的柱温30℃与流速0.5ml·min^-1作为色谱条件。

作为本发明最优选的方案，步骤(2)中，称取桑葚药材样品之前，先将样品粉末过4号筛。

作为本发明最优选的方案，步骤(2)中，将称量好的桑葚药品加入蒸馏水中，加热回流提取0.5-1.5h，优选为1h。

发明人比较了用水作为溶剂超声提取与用水作为溶剂加热回流提取来进行供试品溶液制备的区别，结果表明，用水作为溶剂加热回流提取得到的峰面积较大、峰个数较多、分离度较好，所以选择用加热回流的方式提取。