[发明专利]两个新的达玛烷型三萜类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于医药、功能食品技术领域，涉及绞股蓝总皂苷酸水解产物中两个新的三萜类化合物及其制备方法，本发明还涉及两个新化合物在抗肿瘤生物活性方面的用途。

背景技术

绞股蓝为葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属植物绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino]的干燥全草，为多年生攀缘草本，主要分布于中国、日本、朝鲜等国。绞股蓝是五加科外具有人参皂苷资源的植物之一，具有滋补保健、抗癌防衰、增强体质和改善脂质代谢等多种功能，被誉为“南方人参”。绞股蓝为我国常用中药和药食同源品，又名七胆草、小苦药、遍地生根等。具有清热解毒，止咳化痰，补气生津，健脾安神之功效。临床用于治疗咳嗽、痰喘、老年慢性气管炎、传染性肝炎及劳伤虚损等。现代药学研究表明，其主要药效成分是绞股蓝皂苷(Gypenoside，Gyp)，与人参皂苷的结构一样或十分接近。绞股蓝皂苷有明显的体内外抗肿瘤作用，其直接的细胞毒作用可抑制肿瘤细胞生长繁殖。

随着研究的深入，对人参皂苷和人参皂苷元抗肿瘤作用的构效关系研究发现，苷元的活性强于皂苷。绞股蓝皂苷元对肿瘤细胞同样具有很强的细胞毒活性。在对体外多种人肿瘤细胞的抗癌实验研究中，我们研发了具有抗肿瘤活性的gypensapogenin H和gypensapogenin I，研究证明，它们对体内外肿瘤细胞的抑制作用均优于人参皂苷-Rg3和PPD。

发明内容

本发明的目的是旨在从绞股蓝中寻找新的具更强活性的抗肿瘤前体药物，采用了酸水解法对绞股蓝总皂苷进行水解，得到达玛烷型三萜类化合物gypensapogenin H和gypensapogenin I，并且研究它们的抗肿瘤生物活性和医药用途。

达玛烷型三萜类化合物gypensapogenin H和gypensapogenin I，是通过酸水解法对绞股蓝总皂苷进行水解得到的，其结构式如下：

达玛烷型三萜类化合物gypensapogenin H和gypensapogenin I的制备方法如下：

(1)选用绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino)的干燥全草6000-8000g为原料，用30-95％工业乙醇回流提取3次(8倍量、8倍量、6倍量，质量倍数)，每次2h，合并提取液，减压浓缩得乙醇提取物；

(2)将上述提取物上大孔树脂柱(HPD100)，依次用水、70％乙醇和95％乙醇进行洗脱，减压回收溶剂后得到70％乙醇洗脱物和95％乙醇洗脱物(10-15g)；其中70％乙醇洗脱物为绞股蓝总皂苷部分；

(3)对步骤(2)得到的绞股蓝总皂苷部分进行酸水解，即绞股蓝总皂苷溶解于酸性有机溶液中进行超声酸水解，然后加水沉淀，水洗得到中性的沉淀；

(4)对步骤(3)所得的中性沉淀经硅胶柱层析，分离后得到gypensapogenin H和gypensapogenin I。

所述柱层析用的硅胶粒度为100-400目，柱层析的流动相为石油醚-丙酮系统(石油醚沸程为60-90℃)100∶1-2∶1(V/V)混合溶剂梯度洗脱，每250-400mL体积为一个流分，共收集100-150个流分。经薄层层析硅胶检识，合并得到A1-A7七个流分；

流分A2经石油醚-丙酮10∶1-2∶1混合溶剂梯度洗脱，得到A2-1～A2-6的六个流分，流分A2-1经过重结晶得到白色粉末，即化合物gypensapogenin H。流分A2-2经过重结晶后得到白色粉末，即化合物gypensapogenin I。

gypensapogenin H，白色针晶(丙酮)，易溶于氯仿、丙酮。Liebermann-Barchard反应呈阳性、Molish反应呈阴性，提示为三萜皂苷元化合物。gypensapogenin I，白色粉末(丙酮)，易溶于氯仿、丙酮。Liebermann-Barchard反应呈阳性、Molish反应呈阴性，提示为三萜皂苷元化合物。

本发明所述的三萜类化合物(gypensapogenin H和gypensapogenin I)具有较好的抗肿瘤活性，它们对体内外肿瘤细胞的抑制作用均优于人参皂苷-Rg3和PPD。本发明化合物的制备方法简单，重现性好，提取纯度高，并且获得的化合物具有较好的抗肿瘤活性。

附图说明

图1为化合物gypensapogenin H的¹H NMR