[发明专利]一种从动物胆中提取胆红素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从动物胆中提取胆红素的方法，属于生物制药领域。

背景技术

胆红素是胆色素的一种，为体内的血红蛋白分解代谢后的还原产物，胆汁的胆红素含70-80％的二葡萄糖醛酸酯，20-30％的单葡萄糖醛酸酯及微量的胆红素与葡萄糖或木糖的结合物。胆红素制品为淡橙色或深红色的单斜晶体，干燥固体较稳定，其氯仿溶液置暗处也较稳定，在碱液中或遇三价铁离子极不稳定，很快被氧化为胆绿素，而与甘氨酸、丙氨酸或组氨酸结合，加血清蛋白，维生素丙或乙二胺四乙酸二酸钠，可使其稳定。胆红素不溶于水，溶于苯，氯仿，氯苯，二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇和乙醚。

胆红素有镇静、镇惊、解热、降压、促进红血球新生，对乙型脑炎病毒和W256癌细胞有抑制作用是制作人工牛黄的重要原料，人工牛黄属于贵重药品，有去惊痛、寒热、中风失音、除热等功效。目前，生产胆红素的方法主要有萃取法和钙盐法，萃取法是利用胆红素溶于氯仿而不溶于水的特性将胆红素从胆汁中萃取而得，收率为万分之2左右。该方法也需用氯仿，不利于人体健康，而且胆红素的收率也较低，成本较高。钙盐法是将猪胆汁水解后加入氢氧化钙使胆红素和钙反应得到钙盐沉淀，沉淀加水并加入盐酸至pH值为1.5，然后加入乙醇得到粗胆红素沉淀，加入氯仿将粗胆红素溶解，过滤，滤液蒸发得到符合药典要求的胆红素。其收率为万分之1.5左右，该方法需要用氯仿溶解胆红素，不利于人体健康，而且在提取胆红素过程中，酸解取得的胆红素，长时间和酸接触，使其发生酸催化异构化，而造成较大的损失，因此胆红素的收率较低，成本较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对钙盐法生产胆红素需要用氯仿溶解胆红素，不利于人体健康，而且在提取胆红素过程中，酸解取得的胆红素，长时间和酸接触，使其发生酸催化异构化，导致胆红素的收率较低，成本较高的弊端，提供了一种从动物胆中提取胆红素的方法，该方法将动物胆经氯化钠溶液浸泡切块，尿酸浸泡加入碘化银混合挤压得汁液，进行微生物酶解厌氧发酵后，加入硫酸锌溶液，用氢氧化钠和盐酸溶液进行调节pH值，搅拌降温，静置沉淀过滤，收集过滤物和过滤液，再将所得过滤液用半透膜过滤得过滤物，将所得过滤物混合，用无水乙醇进行洗涤，干燥至室温而得。该方法生产胆红素的收率高，成本低。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

（1）取4～5kg动物胆放入容器中，使用质量浓度为70～80％的氯化钠溶液浸泡5～7天，温度保持为30～35℃，用氮气将容器内的空气排出，然后将其取出，放入切肉机中切割成块；

（2）将上述切割成块的动物胆放入容器中，向其中加入质量分数为0.6～1.2％的尿酸溶液浸泡动物胆，再加入800～900g碘化银，搅拌均匀，再将容器置于光照强度为8000～10000lux的环境下10～15min，然后缓慢升温至2～4℃，升温速率为2℃/min；

（3）待上述升温结束后，将容器中的混合物放入挤压机中进行挤压，收集挤压出的汁液，将所得的汁液放入发酵罐中，向其中分别加入汁液体积2～3倍的水、100～200g葡萄糖、300～500g牛肉膏、80～110g80～90目废弃蘑菇培养基、120～140g脂肪酶和200～230g木瓜蛋白酶，搅拌均匀密封发酵10～15天，发酵前4～6天，每隔12～14h将容器打开进行翻搅一次；

（4）待上述发酵结束后，取发酵液放入容器中，向其中加入发酵液体积5～10％的质量浓度为30～40％硫辛酸溶液，再使用质量浓度为60～70％的氢氧化钠调节pH为10～11，加热至80～90℃，搅拌10～15min，然后趁热使用质量浓度为80％的盐酸溶液调节pH为6.5～7.0，搅拌均匀，快速降温至20～25℃，静置直至无沉淀产生，过滤，收集过滤物；

（5）将上述所得的过滤液使用半透膜进行过滤，得过滤物，将所得的过滤物与上述所得的过滤物合并，再使用温度为25～30℃的无水乙醇对过滤物进行洗涤3～5次，然后将其放入烘箱中10～15min，温度控制为60～70℃，待干燥后取出冷却至室温，即可得到胆红素。

本发明与其他方法相比，有益技术效果是：

（1）该方法生产胆红素过程中无需用氯仿等有毒溶剂，所得产品安全性能高，对人体健康无危害；

（2）提取的胆红素收率高，可达万分之3.5以上，胆红素收率高出其他方法万分之2.0～万分之2.5，降低了胆红素的生产成本。

具体实施方式