[发明专利]一种海洋生物肽Xen2174的合成方法

权利要求书

1.一种Xen2174肽的合成方法，包括以下步骤：

步骤(1)：按照Fmoc固相合成方法，在树脂上依次偶联各Fmoc-AA-OH；按照Xen2174肽的氨基酸顺序，从C-端开始依次偶联Fmoc-AA-OH形式的各个氨基酸；所述依次偶联的各Fmoc-AA-OH依次为Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-4Hyp(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Dpm)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Cys(Dpm)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-pGlu-OH；

步骤(2)：固相脱除肽链第4位和第13位半胱氨酸残基上的保护基；

步骤(3)：通过固相氧化形成第一对二硫键，即4-13二硫键；

步骤(4)：脱除树脂，第5位和第10位半胱氨酸残基上的保护基同时被脱除；采用裂解液进行，所述裂解液为三氟乙酸、水、苯甲醚和苯甲硫醚的混合物；以及

步骤(5)：通过液相氧化形成第二对二硫键，即5-10二硫键，其中所使用的氧化剂为辣根过氧化酶。

2.权利要求1的方法，其中步骤(1)中所使用的树脂为氨基树脂。

3.权利要求2的方法，其中

步骤(1)中所使用的树脂为Rink Amide-AM树脂、MBHA树脂或PAL树脂；

树脂的替代度为0.1-1.0 mmol/g；

在进行偶联反应之前，对树脂进行洗涤和溶胀处理；所用溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮和二氯甲烷。

4.权利要求3的方法，其中树脂的替代度为0.2-0.8 mmol/g；所用溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。

5.权利要求4的方法，其中树脂的替代度为0.2-0.5 mmol/g。

6.权利要求5的方法，其中树脂的替代度为0.303 mmol/g。

7.权利要求1或2的方法，其中步骤(1)中所述Fmoc固相合成方法包括以下步骤：

1)脱除Fmoc；

2)将合适量的Fmoc-AA-OH形式的待偶联氨基酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至偶联反应终止；以及

3)重复步骤1)和2)直至偶联上所有的氨基酸。

8.权利要求7的方法，其中脱除Fmoc的试剂为20%的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺溶液；每种氨基酸的偶联反应时间为1.5-4小时；偶联反应在20±5℃和常压下进行。

9.权利要求8的方法，其中每种氨基酸的偶联反应时间为2-3小时。

10.权利要求1或2的方法，其中步骤(1)中所使用的偶联剂为二异丙基碳二亚胺与化合物A的混合物或N,N-二异丙基乙胺与化合物A和化合物B的混合物；

其中化合物A选自1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑，化合物B选自苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基六氟磷酸盐、(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸。

11.权利要求10的方法，其中步骤(1)中所使用的偶联剂为N,N-二异丙基乙胺与化合物A和化合物B的混合物；偶联剂中各成分的比例以摩尔比计为N,N-二异丙基乙胺:化合物A:化合物B=2.0:1.1:1.0。