[发明专利]用于环境真菌生物多样性高通量测序的复合标签及其应用在审
| 申请号： | 201510628184.0 | 申请日： | 2015-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN105331684A | 公开（公告）日： | 2016-02-17 |
| 发明（设计）人： | 高其康;李梅;楼兵干 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 黄平英 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 环境 真菌 生物多样性 通量 复合 标签 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于环境真菌生物多样性高通量测序的复合标签，其特征在于，其碱基序列如如下序列编号NO.1～NO.48所示：
2.一种利用权利要求1所述复合标签进行超高通量基因测序的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取每一个样本的总DNA；
(2)对每一个样本，从权利要求1中所示48对且未被选择过的序列中选择任一一对序列作为引物，对对应样本的总DNA进行扩增；
(3)对每一个样本的扩增产物进行电泳检测，对扩增产物进行纯化回收；
(4)对每个样本纯化回收后的产物紫外分光光度计精确定量；
(5)将所有样本等量混合后建立一个测序文库；
(6)对所建测序文库进行高通量测序。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述样本为含有真菌的样本。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，对对应样本的总DNA进行扩增的PCR扩增体系为：
50ng样本总DNA，4μLMg2+，5μL10×Buffer，4μL浓度为5nmoldNTP，1.5UTaq酶，浓度为10pmol引物各1.5μL，补水至50μL。
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