[发明专利]一种在体内精原干细胞基因组中引入随机插入突变的方法

权利要求书

1.一种在体内精原干细胞基因组中引入随机插入突变的方法，其特征是可用于制备基因组中携带一个或多个转座子随机插入突变的非人基因突变动物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是将携带转座子的非整合型慢病毒复合载体和携带转座酶的非整合型慢病毒复合载体同时直接注射入处于发育期的雄性非人动物睾丸内，感染体内精原干细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述的非整合型慢病毒复合载体，其特征是其慢病毒整合酶氨基酸序列中包含D64N/D116N突变，使其无法整合入靶细胞基因组内。

4.根据权利要求2和3所述的方法，其中所述的非整合型慢病毒复合载体，其特征是由转座子-慢病毒复合载体质粒，Δ8.9-D64N/D116N非整合性包装结构质粒和VSV-G包膜质粒共转染293T细胞，并通过上清高速离心浓缩获得。

5.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述的转座子为piggyBac转座子，其特征是可以由非整合型慢病毒导入体内精原干细胞内并发生转座从而引入随机插入突变。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述的转座酶为piggyBac转座酶，其特征是可以由非整合型慢病毒导入体内精原干细胞内并介导piggyBac转座子发生转座。

7.根据权利要求1，2和5所述的方法，其中所述的转座子中可携带的核酸片段包括但不限于启动子，调控元件，报告基因，基因编码序列，聚腺苷酸转录终止信号，基因敲低构建，基因捕获构建。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述的非人基因突变动物可由被携带转座子的非整合型慢病毒复合载体和携带转座酶的非整合型慢病毒复合载体同时注射后的雄性动物在成年后与野生型雌性动物交配获得。

9.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述的非人动物包括但不限于小鼠，大鼠，猪，牛，羊和猴。