[发明专利]一株高效利用乳清产乙醇的酿酒酵母工程菌及其构建方法

权利要求书

1.一种高效利用乳清生产燃料乙醇的酿酒酵母工程菌株，具体为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）AY5MG，保藏编号为CGMCC No.11223。

2.一种权利要求1所述高效利用乳清生产燃料乙醇的酿酒酵母工程菌株的构建方法，其特征在于，所述构建方法是通过强启动子PGK1分别表达乳糖分解酶基因LAC4及乳糖通透酶基因LAC12，同时敲除MIG1、NTH1以及GAL6基因，在缓解葡萄糖阻遏现象的同时消除酿酒酵母菌自身的半乳糖代谢调控，得到乳清利用性酿酒酵母工程菌。

3.根据权利要求2所述的高效利用乳清生产燃料乙醇的酿酒酵母工程菌株的构建方法，包括以下步骤：

（1）以酿酒酵母基因组为模版，将PCR扩增出的GAL6基因的上、下游片段GAL6A和GAL6B与pUC19质粒连接得到质粒pUC-G6AB；

（2）将来源于Yep-C质粒的铜抗性基因CUP1与pUC-G6AB连接，得到质粒pUC-G6AB-CUP1；

（3）利用PCR扩增技术，以质粒pUC-G6AB-CUP1为模板，扩增出GAL6基因的同源重组片段GAL6A-CUP1-GAL6B；

（4）采用醋酸锂转化法将GAL6A-CUP1-GAL6B同源重组片段导入到酿酒酵母受体菌株的a型和α型单倍体，得到同源重组后的酿酒酵母基因工程单倍体菌株；所述受体菌株是保藏号为 CGMCC No.5843的基因工程菌。

（5）将纯化后的酿酒酵母a型和α型重组单倍体进行融合，通过抗性平板和生孢实验筛选得到可以利用乳清的酿酒酵母工程菌。