[发明专利]一种检测微生物的方法有效
| 申请号： | 201510632753.9 | 申请日： | 2015-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN105203577B | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | 杜美红;杨寅;代凤英;张淼 | 申请（专利权）人： | 北京市理化分析测试中心 |
| 主分类号： | G01N24/08 | 分类号： | G01N24/08 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 严政;李婉婉 |
| 地址： | 100089 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 微生物 方法 | ||
1.一种检测微生物的方法，其特征在于，该方法由以下步骤组成：
(1)将能够特异地与微生物结合的第一抗体偶联在非磁性微球上，得到免疫微球，而将能够与所述第一抗体结合的第二抗体偶联在磁球上，得到免疫磁球，所述磁球的粒径为10-80nm；
(2)将免疫微球与液体形式的待测样品进行混合，混合的条件使得当待测样品中存在所述微生物时，免疫微球能够特异性地吸附微生物，所述待测样品为食品和/或药品；
(3)将步骤(2)得到的混合后的物料与免疫磁球混合，混合的条件使得第一抗体能够与第二抗体结合；
(4)将步骤(3)得到的混合后的物料置于分选磁场中进行磁分离，除去未结合在免疫磁球上的物质；
(5)重悬磁分离得到的沉淀物，并将得到的重悬液进行核磁共振而检测横向弛豫时间，根据横向弛豫时间判断待测样品中的微生物的含量；
其中，所述微生物为沙门氏菌(Salmonella)，所述第一抗体为编号为01-91-99的KPL多克隆抗体；
所述非磁性微球为表面羧基化的二氧化硅微球和/或聚苯乙烯微球；
所述磁球为表面修饰有羧基的超顺磁性Fe
2.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于每克的非磁性微球，所述第一抗体的用量为10-50mg。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述非磁性微球的粒径为100-200nm。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于每克的磁球，所述第二抗体的用量为20-100mg。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其中，所述磁球的粒径为10-20nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于每毫升的液体形式的待测样品，所述免疫微球的用量为100-900μg，所述免疫磁球的用量为100-600μg。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)或步骤(3)中，混合的条件包括：温度为室温，时间为25-35min。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中，所述磁分离的条件包括：温度为室温，时间为25-35min。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(5)中，重悬所用的溶液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液含有0.144-0.162mol/L的磷酸氢二钠和0.038-0.056mol/L的磷酸二氢钠。
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