[发明专利]乳腺癌联合诊断标志物及检测试剂盒

说明书

本发明公开了乳腺癌联合诊断标志物及检测试剂盒，研究发现RECQL、RECQL4及RECQL5基因可以作为联合标志物用于制备乳腺癌检测和/或疗效评价试剂。本发明提供的根据以上标志物以及以GAPDH作为内参基因设计的特异性RT‑PCR引物和探针组成试剂盒，能够通过实时荧光定量PCR的方法测定患者外周血单核细胞中以及尿液中游离的RECQL、RECQL4及RECQL5基因mRNA的含量，进行乳腺癌的诊断和疗效评估。与常规诊断方法相比，本发明的方法具有创伤小，快速、高通量、灵敏和特异性好等特点，能更好地进行乳腺癌的早期诊断及疗效评价。

技术领域

本发明涉及生物化学与分子生物学领域，具体涉及乳腺癌联合诊断标志物及检测试剂盒。

背景技术

中国癌症负担在不断增加，每年有160万人被诊断为癌症，120万人死于癌症。和其他很多国家一样，乳腺癌是中国女性最常见的癌症，在全球范围内，中国占据新诊断乳腺癌病例的12.2％，占据乳腺癌死亡的9.6％。

乳腺癌属于全身性疾病，发病率呈逐年上升、发病年龄呈逐渐年轻化的趋势,作为一种高度异质性肿瘤，早期可出现淋巴或血行转移，是女性常见的恶性肿瘤之一。

虽然目前中国乳腺癌发病率低，但是从90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的两倍多，城市地区尤为显著。目前，乳腺癌是中国女性发病率最高的癌症，癌症死亡原因位居第六。截至2008年，中国总计169452例新发浸润性乳腺癌，44908例死于乳腺癌，分别占到全世界的12.2％和9.6％。

中国乳腺癌全年检出人数是欧洲(2008年共计332000例，总人口四亿九千八百万)的一半，与美国(2008年共计182000例，总人口三亿零四百万)基本相当。如果这一趋势保持不变，到2021年，中国乳腺癌患者将高达250万，发病率将从不到60例/10万女性(年龄在55岁到69岁之间)增加到超过100例/10万女性。(Lancet Oncol 2014；15(7):e279-e289)

目前，国际上对乳腺癌的预警和早期诊断的技术主要有以下三种：

1.临床体格检查：定期接受临床体格检查是早期发现乳腺癌的有效方法之一。始于1963年纽约的健康保险计划(HIP)，历经18年研究发现，接受定期临床体格检查的妇女乳腺癌死亡率比对照组低23％。我国也开展了一系列乳腺癌的预防工作，但是，乳腺癌普查耗资巨大，成本/效果比高。

2.影像学诊断法：影像学检查是以钼靶X线摄片为主要手段，辅以超声扫描和MRI扫描。钼靶X线摄片方法能发现细小钙化点，如果表现为泥沙样钙化或细颗粒样钙化，或者每1cm²内＜0.5mm的超过5枚则可提示乳腺癌。但对于不典型的病变，尤其是致密型乳腺内的病变及近胸壁的病变易漏诊。2014年2月11日发表在著名的《英国医学杂志》上一项研究报告40～59岁女性的每年乳腺钼靶X线检查并不能降低乳腺癌的死亡率，也不优于普通体检的诊断率，而且有22％的女性因为乳腺钼靶X线检查被过度诊断了(British MedicalJournal,2014,348.)。另外，我国女性乳腺小而致密，这也会降低患者接受钼靶检查的阳性率。

3.生物靶标早期检测：包括乳腺癌相关基因普查，例如BRCA1和BRCA2的突变分析；乳头溢液特异物检测及血清肿瘤标志物的测定。Her-2/neu癌基因在乳腺癌中过度表达，在血清中可以检测到Her-2蛋白片断。通过酶联免疫反应测定血清Her-2水平，可以作为诊断乳腺癌的指标之一。但目前分子诊断研究大多关注基因多态性与乳腺癌的关系，只能给出患者的易感风险，不适用于临床疾病的诊断。

因此，本领域迫切需要建立新的乳腺癌检查技术，能够早期客观、灵敏和稳定的诊断乳腺癌,以便进行及时、有针对性的治疗，提高患者的生存质量和生存率，降低医疗成本，节约社会资源。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中检测手段的上述缺陷，提供新的乳腺癌联合诊断标志物。