[发明专利]一种新生兔透明骨骼标本的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及标本制作方法技术领域，具体涉及一种新生兔透明骨骼标本制作方法。

背景技术

透明标本，可显示用一般解剖方法难以观察清楚的内部结构。它可以在保持标本外形完整的情况下，显示出体内骨骼的功能位置关系和骨骼发育情况。广泛应用于医学解剖学、生物学、动物学、动物骨骼发育等专业的教学。其制作原理是用化学和物理的方法，先对动物的骨骼进行固定、染色，再使软组织的折光率和透明剂的相近，达到软组织透明，而使骨组织清晰显现。透明骨骼标本不仅在“动物学”、“动物解剖学”、“动物影像学”等教学中作为直观、形象的教具活跃课堂气氛，增强学生的感知能力，而且在制作过程中可以让学生参与，让学生了解和掌握标本制作过程，同时培养学生的动手、动脑能力。在科学研究方面，动物骨骼标本可以不受时间、地点的限制，为科研提供研究材料。在科普宣传方面，通过动物骨骼标本的陈列展览，增强人们对野生动物的认识，有利于加强珍稀及濒临灭绝动物的保护工作。因此，对于教育和科研工作者来说，掌握动物骨骼标本制作的技术具有重要意义。

目前，透明骨骼标本制作方法一般包括以下步骤：取材、固定、脱水、脱脂、透明、染色、脱色和保存。其中通常采用80%乙醇、90%乙醇和无水乙醇由低浓度至高浓度对标本梯度脱水，脱水后变形严重。透明处理常用透明剂为氢氧化钾或氢氧化钠，氢氧化钾和氢氧化钠透明效果好，但腐蚀性强，当浓度超过3.5%或透明时间过长时，容易使标本骨骼脆裂、失去应有的色泽和完整性，造成制作失败。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全无毒、成本低廉、透明效果好的新生兔透明骨骼标本的制作方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种新生兔透明骨骼标本制作方法，包括以下步骤：

步骤一、取新出生1天的兔，微创去除内脏和脑组织，洗净胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸张状态，用4%的甲醛溶液固定10天或无水乙醇固定7天；

步骤二、用流水冲洗姿态固定的新生兔标本，再用5%过氧化氢溶液或1%氢氧化钾溶液漂白7天；

步骤三、用乙醇由低浓度至高浓度对步骤二漂白处理后的新生兔进行梯度脱水，每个浓度梯度5-7天；

步骤四、先用质量浓度为1%的氢氧化钾溶液对步骤三脱水后的新生兔透明处理2天，之后再用甘油氢氧化钾透明液中透明处理5天，所述甘油氢氧化钾透明液中氢氧化钾的质量浓度为4.5%，甘油所占质量百分百为40%，其余为水；

步骤五、依次用茜素红染色液和阿利新蓝染色液对透明处理后的新生兔进行染色，各染色7天，使骨骼、肌肉和软骨着色；

步骤六、用1%氢氧化钾溶液或20%铵甘油脱色剂对染色后的新生兔标本脱色5天，使肌肉脱去颜色，即得新生兔透明骨骼标本；

步骤七、将步骤六得到的新生兔透明骨骼标本依次用20%甘油溶液、30%甘油溶液、40%甘油溶液、50%甘油溶液、60%甘油溶液、70%甘油溶液和100%甘油梯度脱水，甘油在脱水的同时将肌肉未脱净的颜色或脱色液残留的铵脱去，然后将新生兔透明骨骼标本保存在甘油中。

进一步改进，步骤三所述乙醇由低浓度至高浓度依次为50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和无水乙醇。

进一步改进，步骤五所述茜素红染色液为2%的茜素红乙醇染液或含2%氢氧化钾的0.04%的茜素红染液；所述阿利新蓝染色液由含0.2%阿利新蓝的70%乙醇溶液、70%乙醇溶液与冰醋酸按体积比1:18:1的比例配制而成。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和无水乙醇由低浓度至高浓度对漂白处理后的新生兔标本进行梯度脱水，增加了脱水梯度，并减小了梯度差，使脱水力度柔和而彻底，可以防止脱水过程中标本变形或变性；本发明采用氢氧化钾与甘油两种透明剂结合使用的方法，先用低浓度的氢氧化钾溶液透明2天，透明较为柔和，不损伤标本，之后再转移至甘油氢氧化钾透明液中透明处理5天，由于甘油的存在，减弱了氢氧化钾对标本的腐蚀，氢氧化钾的浓度可提高到3.5%以上，提高透明效果；本发明使用了阿利新蓝染液，使软骨着色为蓝色，透明骨骼标本色彩亮丽，更加美观。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明做作进一步详细的说明。

实施例1

步骤一、取新出生1天的兔，微创去除内脏和脑组织，洗净胸腔和腹腔，使其四肢呈自然伸张状态，用4%的甲醛溶液固定10天；

步骤二、用流水冲洗姿态固定的新生兔标本，再用1%氢氧化钾溶液漂白7天；