[发明专利]一种流感嗜血杆菌融合蛋白及其构建方法与应用

说明书

本发明提供了一种流感嗜血杆菌融合蛋白及其构建方法与应用，所述融合蛋白是由流感嗜血杆菌HiD蛋白基因和流感嗜血杆菌Hin47蛋白基因以1:1的方式形成融合基因，其后转化原核表达系统得到的融合基因表达系统；该融合蛋白可有效的增强Hin47和HiD单个蛋白抗原的免疫原性，Hin47‑HiD作为结合疫苗蛋白载体，可有效增强多糖抗原的免疫原性；以融合蛋白Hin47‑HiD作为结合疫苗蛋白载体，开发的Hia和Hib二价结合疫苗，可同时预防侵袭性和非侵袭性流感嗜血杆菌。

技术领域

本发明涉及疫苗产品开发技术领域，尤其是一种流感嗜血杆菌融合蛋白及其构建方法与应用。

背景技术

流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza,Hi)是一类无动力、无芽孢，呈杆状的革兰氏阴性杆菌，寄居于正常人的呼吸道，属条件致病菌，主要引起儿童上呼吸道感染，中耳炎和肺炎，亦可引起败血症、脑膜炎等严重感染。

流感嗜血杆菌分为荚膜型(可分型)和无荚膜型(不可分型)，荚膜型的流感嗜血杆菌根据荚膜多糖的成分不同又可分为a、b、c、d、e、f共6种血清型。无荚膜型又称之为不可分型流感嗜血杆菌(NontypeableHaemophilus influenza,NTHI)。

流感嗜血杆菌侵入性疾病在全世界均有发生。b型流感嗜血杆菌(Hib)的毒性最强，是5岁以下儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌。随着Hib结合疫苗在全球范围的推广使用，b型流感嗜血杆菌的发病率大幅下降。Hib结合疫苗是基于b型流感嗜血杆菌荚膜多糖开发的。荚膜多糖是荚膜型流感嗜血杆菌的主要抗原物质，能在人体中诱发保护力免疫反应，但是荚膜多糖为胸腺非依赖性抗原，虽可产生较弱的IgM抗体但是不产生免疫记忆，不能对2岁以内婴幼儿产生有效保护。疫苗开发者将荚膜多糖结合到蛋白载体上形成多糖蛋白结合疫苗，蛋白载体使多糖抗原由胸腺非依赖性抗原变为胸腺依赖性抗原，从而激活T辅助淋巴细胞，促使B细胞产生特异性IgG抗体，这使得Hib结合疫苗得到广泛应用。然而Hib结合疫苗仅对B型流感嗜血杆菌有效，不能对其它型流感嗜血杆菌及不可分型流感嗜血杆菌产生预防作用，这导致其它型流感嗜血杆菌及不可分型流感嗜血杆菌的感染率大幅上升。例如，不可分型流感嗜血杆菌可导致中耳炎(OM)，不分型流感嗜血杆菌埃及生物群引起流行性结膜炎和巴西紫热。全球尚没有批准的用于预防b型以外的其它型流感嗜血杆菌或不可分型嗜血杆菌的疫苗。

D蛋白是流感嗜血杆菌表面的一种脂蛋白(HiD)，相对分子量为42KDa，D蛋白在所有流感嗜血杆菌菌株(包括有荚膜和无荚膜的流感嗜血杆菌)中高度保守，是人免疫球蛋白D的特异性抗原。尽管D蛋白可有效预防NTHi引起的中耳炎，但HiD相对分子量较小，其免疫原性较弱。

Hin47(又称HtrA)是流感嗜血杆菌在环境压力条件下表达的热休克蛋白，具丝氨酸蛋白酶活性。Hin47是重要的免疫抗原，实验证明其可刺激机体产生B细胞和T细胞反应，其免疫原性已得到充分证实。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种结合疫苗蛋白载体Hin47-HiD融合蛋白。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述融合蛋白的构建方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述融合蛋白的的应用，以Hin47-HiD作为Hia和Hib结合疫苗的蛋白载体，开发通用性流感嗜血杆菌结合疫苗。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种流感嗜血杆菌融合蛋白，为流感嗜血杆菌HiD蛋白和流感嗜血杆菌Hin47蛋白融合而成，即Hin47-HiD，Hin47的氨基酸序列为序列表<400>1所示序列，HiD的氨基酸序列为序列表<400>3所示序列。