[发明专利]一种高纯度海藻糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌加工领域，具体涉及一种高纯度海藻糖的制备方法。

背景技术

食用菌作为一种大型真菌，其中的碳水化合物含量很高，一般占干重的60％左右，其中海藻糖(Trehalose)在许多品种的食用菌中广泛存在，例如杏鲍菇、平菇和香菇的子实体中海藻糖的含量可达10-25％，杏鲍菇加工的下脚料中海藻糖含量也可达到10-15％。它是由两分子葡萄糖残基通过半缩醛羟基结合的非还原性二糖，由于其具有对干燥生物制品的保护作用，是一种良好的天然保藏剂，作为防冻剂加入到动物细胞血清培养基中，可以大大提高细胞存活率；加入酶液中，可以有效防止蛋白变性和酶活降低；海藻糖的甜度较低，加入食品中风味不会受影响，也不会发生化学反应，是一种理想的食品保藏剂；同时作为一种良好的保湿剂，可在化妆品行业中使用。

在食用菌的深加工过程中，在大分子量的多糖、具有较高活性的萜类、甾类小分子物质被分离、制备后，海藻糖仍大量存在于残留的提取液中，如不加以纯化利用则会形成较大的浪费。目前生产中采用的海藻糖制备技术，目标物质主要为酵母等微生物的发酵液，尚无涉及食用菌这类大型真菌提取液中海藻糖的分离纯化技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度海藻糖的制备方法，该方法包括如下步骤：

①10000分子量超滤；

将食用菌提取液进行10000分子量超滤操作；

②1000分子量纳滤

将小于10000分子量部分的提取液同时进行1000分子量纳滤操作；

③结晶

将超滤-纳滤处理后的分子量10000-1000的料液浓缩至可溶性固形物含量达到重量百分比含量为40-50％时，加入95％乙醇，于4℃下静置过夜，得到粗结晶；

④重结晶

将收集到的海藻糖粗结晶与水-乙醇的混合溶液混合，进行重结晶，抽滤后干燥，得到高纯度的海藻糖晶体。

具体的说，本发明的一种高纯度海藻糖的制备方法，该方法包括如下步骤：

①10000分子量超滤；

将食用菌提取液进行超滤操作，超滤柱的柱后压力控制在3kg/cm²，并在料液体积减少，浓度提升后，逐步补水稀释料液浓度以保持超滤通量，至总补加水体积达到原料液体积的1倍时停止，分离得到的小于10000分子量料液继续进行下一步纳滤操作；

②1000分子量纳滤

将小于10000分子量部分提取液进行纳滤操作，此操作与10000分子量超滤操作同时进行，纳滤柱的柱后压力控制在4kg/cm²，同时在料液浓度升高时补水稀释料液保持纳滤通量，总补水体积达到原料液体积的1倍时停止；

③结晶

将超滤-纳滤处理后的分子量10000至1000部分料液浓缩至可溶性固形物含量达到重量百分比含量为40-50％，按1:5体积比加入95％乙醇，一边加入一边搅拌，于4℃下静置过夜，之后将结晶与乙醇溶液进行抽滤处理后，得到粗结晶，滤液回收乙醇后，再次用于粗结晶操作；

④重结晶

将收集到的海藻糖粗结晶与水-乙醇的混合溶液(水与95％乙醇的体积比为1:5)按1:2的重量比例混合，加热使结晶溶解，静置冷却至室温再置于4℃下重结晶，抽滤后干燥，得到高纯度的海藻糖晶体。

本发明使用的食用菌提取液的原料可来自杏鲍菇、平菇、香菇；食用菌提取液是食用菌经过水提后得到的提取液。

本发明所提供的一种高纯度海藻糖的制备方法具备如下创新点：海藻糖的得率高，纯度高，该方法充分利用了杏鲍菇的提取液，发明方法过程中得到的小于10000分子量部分提取液能够制备得到高纯度的海藻糖结晶，大于10000分子量部分提取液还可用于制备多糖。

附图说明

图1工艺路线图

图2海藻糖离子色谱图

其中：1:岩藻糖；2:阿拉伯糖醇；3:海藻糖；4:甘露醇；5:甘露糖；6:葡萄糖；7:半乳糖

具体实施方式

超滤设备：上海贝鸿生物科技有限公司生产的纳滤超滤反渗透一体机，型号BH-UF-NF-RO-3-2012；

超滤膜：安得膜分离技术工程(北京)有限公司生产的10000分子量和1000分子量滤膜，型号分别为UF10和PES1。

实施例1