[发明专利]一种高效安全的转座子整合系统及其用途

权利要求书

1.一种核酸构建体，其依次包含如下元件：

转座子5’末端重复序列、多克隆插入位点、polyA加尾信号序列、转座子3’末端重复序列、转座酶编码序列以及控制该转座酶表达的启动子；

其中，

所述多克隆插入位点用于可操作地插入外源基因编码序列以及可选的控制外源基因表达的启动子；

所述polyA加尾信号序列正反向均具有polyA加尾信号功能；

所述转座酶的表达框的方向与外源基因表达框的方向相反；

其中，所述转座酶编码序列含有或者可操作地连接单拷贝或者多拷贝的核定位信号编码序列。

2.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，所述转座子5’末端重复序列与所述转座子3’末端重复序列的位置能够互换。

3.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，

所述转座子5’末端重复序列为PiggyBac转座子5’末端重复序列；

所述转座子3’末端重复序列为PiggyBac转座子3’末端重复序列；

所述转座酶为PiggyBac转座酶。

4.根据权利要求3所述的核酸构建体，其中，

所述PiggyBac转座子5’末端重复序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；和/或

所述PiggyBac转座子3’末端重复序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；和/或

所述PiggyBac转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。

5.根据权利要求3所述的核酸构建体，其中，所述PiggyBac转座酶的编码核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

6.根据根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，所述核定位信号编码序列为c-myc核定位信号编码序列。

7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的核酸构建体，其特征在于如下的(1)-(3)项中的任意一项或者多项：

(1)所述多克隆插入位点的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

(2)所述polyA加尾信号序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

(3)所述启动子选自CMV启动子、EF1α启动子、SV40启动子、Ubiquitin B启动子、CAG启动子、HSP70启动子、PGK-1启动子、β-actin启动子、TK启动子和GRP78启动子。

8.根据权利要求7所述的核酸构建体，其中，第(3)项中，所述CMV启动子的序列SEQ IDNO:6所示。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的核酸构建体，其多克隆插入位点可操作地插入有一个或多个相同或不同的外源基因以及可选的控制外源基因表达的启动子，或者其多克隆插入位点被替换为一个或多个相同或不同的外源基因编码序列以及可选的控制外源基因表达的启动子；所述外源基因独立地为单拷贝或多拷贝。

10.根据权利要求9所述的核酸构建体，其中，所述外源基因选自天然功能蛋白基因、RNAi基因以及人工嵌合基因中的一种或多种。

11.根据权利要求10所述的核酸构建体，其中，所述天然功能蛋白基因选自荧光素报告基因和荧光素酶基因中的一种或多种。

12.根据权利要求11所述的核酸构建体，其中，所述荧光素报告基因是编码绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或黄色荧光蛋白的基因。

13.根据权利要求11所述的核酸构建体，其中，所述荧光素酶基因是编码萤火虫荧光素酶或海肾荧光素酶的基因。

14.根据权利要求10所述的核酸构建体，其中，所述天然功能蛋白基因是编码TP53、GM-CSF、OCT4、SOX2、Nanog、KLF4或c-Myc的基因。