[发明专利]一种食用菌菌丝快速PCR方法在审
| 申请号： | 201510641076.7 | 申请日： | 2015-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN105200139A | 公开（公告）日： | 2015-12-30 |
| 发明（设计）人： | 汪虹;陈明杰;赵妍;冯爱萍;辛苗苗 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 食用菌 菌丝 快速 pcr 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种食用菌菌丝快速PCR方法，包括：
(1)用移液器吸取裂解液置于PCR管中，用灭菌牙签挑取预先培养的食用菌菌丝置于裂解液中离心，振荡，再离心；
(2)以上述得到的菌丝裂解液为模板进行PCR扩增，PCR反应体系：12.5μL扩增混合液，待扩增基因特异性引物对各0.5μL，菌丝裂解液0.5μL，ddH2O11μL；PCR反应条件：95℃5min；95℃30s，(引物Tm值-5)℃30s，72℃1min，35个循环；72℃10min；
(3)取上述PCR扩增产物与加样缓冲液混匀，点样于琼脂糖凝胶上，于缓冲液中电泳，电泳结束后，用EB染色，然后拍照，即可。
2.根据权利要求1所述的一种食用菌菌丝快速PCR方法，其特征在于：所述步骤(1)中的裂解液占PCR管体积的1/10。
3.根据权利要求1所述的一种食用菌菌丝快速PCR方法，其特征在于：所述步骤(3)中的PCR扩增产物与加样缓冲液的体积比为5:1。
4.根据权利要求1所述的一种食用菌菌丝快速PCR方法，其特征在于：所述步骤(3)中的琼脂糖凝胶浓度为1.5％。
5.根据权利要求1所述的一种食用菌菌丝快速PCR方法，其特征在于：所述步骤(3)中的电泳电压为5V/cm。
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