[发明专利]一种乌拉立肽的合成方法

说明书

本发明涉及医药技术领域，公开了一种乌拉立肽的合成方法。本发明所述合成方法将乌拉立肽线性肽粗肽或精肽加入到熔点在20℃以下的离子液体中，在碱性环境下氧化0.5‑3h，获得形成二硫键的乌拉立肽粗品。本发明以室温离子液体替代了传统氧化环节中的有机溶剂和水的液相氧化介质，使得固相合成的乌拉立肽粗肽纯度以及精肽总收率得到显著提高，同时氧化反应时间可大幅减少，操作方便，避免有机废液的产生。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种乌拉立肽的合成方法。

背景技术

乌拉立肽(Ularitide)是从人体尿液中分离出来的一种利钠肽，其分析结构与心房利钠肽类似，区别仅仅是在于其序列N-端多出四个氨基酸残基。相关的研究表明，乌拉立肽具有扩张血管、扩张支气管和利尿等多种作用，临床上对心力衰竭、肾衰竭、肺动脉高压及支气管哮喘均有一定的治疗作用。

乌拉立肽的结构为32个氨基酸组成的含有一对分子内二硫键的多肽，一般通过化学合成制得，序列结构为：

H-Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH(S-S)。

目前，针对乌拉立肽的合成方法，主要有两种。一种是在固相中完成线性肽肽树脂的偶联，然后采用碘固相氧化形成相应的二硫键；另一种方法是先固相合成线性肽前体，然后在浓度非常低的有机溶剂/水溶液中，液相氧化形成相应的二硫键。

从现有方法可以看出，乌拉立肽的合成主要分为氨基酸偶联和氧化反应两个阶段。前者将得到的线性肽树脂加入固体碘单质，氧化形成二硫键，得到氧化后成环的肽树脂，裂解后得到粗品。但是采用碘在肽树脂上进行氧化，碘在整个过程中难以完全洗脱，容易导致最终的纯品即原料药中含有微量的碘，导致原料药偏黄色。此外，采用强氧化剂对肽进行氧化，容易破坏肽序自身的二级结构，最终将影响肽本身的生物活性及药效。

而后者将得到线性肽的粗肽经过HPLC纯化，得到线性肽精肽。线性肽精肽用甲醇或者乙腈溶解，加入水稀释到10^-3mg/ml的浓度，在空气和碱性条件下氧化72h，得到氧化后的环肽粗品。环肽粗品经过HPLC纯化后，得到精肽。相对于前者的优势是，最终产物的空间二级结构能够得到完整的保留，最终精肽的生物活性相对于前者来说要好一些。但是，采用该方案进行氧化，由于乌拉立肽溶解困难，且最终氧化需要在非常稀的浓度下进行，操作非常困难，同时反应时间长，不利于大规模生产。此外，该方法会产生大量的有机溶剂和水的混合废液，在环保上也不利于绿色化学的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种乌拉立肽的合成方法，使得所述合成方法能够缩短乌拉立肽线性肽氧化反应时间，同时避免产生有机废液。

本发明的另一个目的在于提供一种乌拉立肽的合成方法，使得所述合成方法能够提高乌拉立肽粗肽纯度以及精肽的总收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种乌拉立肽的合成方法，将乌拉立肽线性肽粗肽或精肽加入到熔点在20℃以下的离子液体中，在碱性条件下氧化0.5-3h，获得形成二硫键的乌拉立肽粗品。

针对现有合成方法中氧化反应时间过长、操作困难、产生有机废液等缺陷，本发明使用熔点在20℃以下的离子液体替代现有的有机溶剂和水为液相氧化的媒介，该体系对于乌拉立肽具有非常好的溶解性，可以在较高的浓度范围内进行氧化，不需要稀释到非常低的浓度下进行，操作方便，同时可以大大缩短氧化反应时间，避免产生有机废液，且增加乌拉立肽的生物活性，可以实现大规模生产。