[发明专利]大熊猫乳汁中关键因子的分析方法

权利要求书

1.一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采集分娩后的大熊猫在不同阶段的乳汁，

（2）通过代谢组学的分析手段对乳汁中的成分因子进行推测鉴定，

（3）将成分因子经过PCA和HCA分析，将大熊猫的泌乳阶段进行分类，

（4）通过OPLS-DA分析方法筛选出不同泌乳阶段信号强且浓度较高的成分因子，并对这些成分因子进行成分鉴定，

（5）通过OPLS分析方法将这些被鉴定的成分因子的成分浓度变化情况与大熊猫幼仔体重增长率进行关联分析，最终筛选到大熊猫乳汁中对于大熊猫幼仔生长具有关键作用的因子。

2.根据权利要求1所述的一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于：步骤（2）中通过代谢组学的分析手段对乳汁中的成分进行推测鉴定的步骤为：

1）将采集的乳汁经降解离心处理后通过LC-MS处理，得到乳汁成分的液相质谱数据；

2）将液相质谱数据与代谢组学数据库对比，筛选得到成分因子LC-HRMS因子。

3.根据权利要求1所述的一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于：步骤（2）中通过代谢组学的分析手段对乳汁中的成分进行推测鉴定的具体方法为：

在室温溶解采集的乳汁样品，各取50μl乳汁样品加入体积比为1:1的methanol/acetonitrile溶液，混合溶液，超声波降解20秒，15000rpm，4?C离心10min，取上清液，将上清液样品置入Accela600HPLC系统后，系统从HiChrom中吸取10ul各样品溶液注入ZIC-pHILIC柱中，整个LC-MS分析过程中，样品上机顺序安排为随机，将所得到的数据输出到Excel表中，消除背景噪音，信号的最大强度必须超过空白对照信号的20倍，否则便被从库中移除，之后用代谢组学数据库并基于准确分子量推测鉴定到乳汁的成分因子LC-HRMS因子。

4.根据权利要求2所述的一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于：步骤（3）中将成分因子经过PCA和HCA分析，将大熊猫的泌乳阶段进行分类的方法为：将经过LC-MS分析后的大熊猫乳汁中的成分因子LC-HRMS因子进行PCA和HCA分析，将大熊猫的泌乳阶段分为初乳阶段、后初乳阶段和常乳阶段；初乳阶段为1-6天，后初乳阶段为6-20天，常乳阶段为20天以上。

5.根据权利要求4所述的一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于：通过OPLS-DA分析方法筛选出不同泌乳阶段信号强且浓度较高的成分因子，并对这些成分因子进行成分鉴定的方法为：根据分类结果将乳汁样品在7天前后的代谢产物分子浓度分别进行准确测定，并进行OPLS-DA分析，筛选出初乳及常乳中信号强及浓度较高的成分因子LC-HRMS因子，将这些成分因子通过MZMine2.10和标准品或元素组分分析进行成分鉴定工作。

6.根据权利要求5所述的一种大熊猫乳汁中关键因子的分析方法，其特征在于：通过OPLS分析方法将这些被鉴定的成分因子的成分浓度变化情况与大熊猫幼仔体重增长率进行关联分析，最终筛选到大熊猫乳汁中对于大熊猫幼仔生长具有关键作用的因子的方法为：记录大熊猫幼仔出生后每天的体重，将当天较前一天体重的增长百分比作为大熊猫体重增长率；鉴定到的乳汁的成分因子LC-HRMS因子的浓度变化作为X变量，将大熊猫幼仔体重增长率作为Y变量，经过OPLS分析，得到与大熊猫幼仔体重增长率显著相关的成分因子，即为大熊猫乳汁中的关键因子。