[发明专利]体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法

权利要求书

1.体外诱导大鼠ADSCs向iHeps分化的方法，其特征包括以下步骤：

a、从离体脂肪组织中分离出大鼠ADSCs；

b、体外诱导培养ADSCs向iHeps分化，诱导分化过程分为以下3个阶段：

内胚层诱导阶段：在步骤a分离得到的ADSCs中加入含有100nM IDE1和3μΜ CHIR99021的RPMI-1640培养基中进行诱导培养，诱导时间为24小时；

成肝诱导阶段：在完成内胚层诱导后的细胞中加入含有100nM IDE和20ng/mL FGF4的RPMI-1640培养基诱导培养72小时；

肝细胞的成熟阶段：在完成成肝诱导后的细胞中加入肝细胞生长因子(HGF)至150ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4(FGF4)至20ng/mL、加入抑瘤素M(OsM)至30ng/mL、加入地塞米松(Dex)至2×10^-5mol/L以及加入ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养，培养时间为120小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分离得到的大鼠ADSCs培养3-7代后再按步骤b所述方法进行诱导培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述大鼠ADSCs在步骤b之前接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中进行后续诱导培养。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述大鼠ADSCs接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中，当细胞长满培养皿底部后按步骤b的进行诱导培养。