[发明专利]一种纤维素酶高效生产方法

权利要求书

1.一种草酸青霉液态发酵生产纤维素酶的方法，其特征在于，整个发酵过程pH调节在3.5～6.0之间，发酵中后期至发酵结束期间进行补料培养，期间控制摄氧率(OUR)维持15(±5)～35(±5)mmol/L/h。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵24h至发酵结束期间进行补料培养。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，补料培养过程中，通过更换桨叶，调节搅拌转速保持溶氧在15％以上，通过补料控制摄氧率(OUR)。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，补料培养期间控制摄氧率(OUR)维持18(±5)～27(±5)mmol/L/h。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵过程pH调节为：发酵开始pH调整为5.5-6.0，0-20hpH逐渐下降，用氨水控制发酵培养基pH3.5以上，50-60h后pH回升至5.5-6.0后，开始用磷酸调节pH至6.0以下。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵过程进行通气量控制，通气量每分钟通气量：发酵体积≥1:1。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵起始溶氧调整至100％，发酵过程中通过调节搅拌转速保持溶氧在15％以上。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，整个发酵过程温度保持28～33℃。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵具体参数控制如下：

(1)pH调节：发酵开始pH调整为5.5-6.0，0-20hpH逐渐下降，用氨水控制发酵培养基pH3.5以上，50-60h后pH回升至5.5-6.0后，开始用磷酸调节pH至6.0以下；

(2)通气量控制：每分钟通气量：发酵体积≥1:1；

(3)溶氧调节：发酵起始溶氧调整至100％，发酵过程中通过调节搅拌转速保持溶氧在15％以上；

(4)温度调控：整个发酵过程温度保持28～33℃；

(5)OUR调节：发酵开始，OUR随菌体浓度增加而逐渐升高，在40-60h左右达到最高值，随着培养基中碳源和氮源的耗尽，发酵开始出现碳氮源限制，反应速率开始下降，OUR开始降低，在OUR出现明显下降后，开始补加葡萄糖、木糖或微晶纤维素、硫酸铵，控制OUR至18-27mmol/L/h之间维持100h。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，发酵前将草酸青霉划线接种于麸皮培养基中28～32℃培养3-5天，待长出粉红色的孢子后转接至新鲜麸皮培养基培养3天作为菌种；接菌种于种子培养基中，28～32℃200rpm发酵24～48h，制备成一级种子，接种一级种子于种子培养基中，28～32℃200rpm培养30～42h制成二级种子，然后将二级种子接种于产酶培养基进行产酶发酵；

培养过程所用的培养基为：

麸皮培养基：7～10％麸皮与适量的自来水中，煮沸30min，8层纱布过滤，再用自来水定容到所需要的体积，加入1.5％的琼脂，配置成麸皮斜面培养基，用于菌种活化与筛选；

种子培养基：1％木糖渣，1％麸皮，1％葡萄糖，1％蛋白胨，0.2％硫酸铵，0.3％磷酸二氢钾，0.05％硫酸镁，50mL于500mL三角瓶中，121℃灭菌20min；

产酶培养基：2～7％木糖渣，1～4％麸皮，0.2～1％微晶纤维素，0.5％豆饼粉，0.2％硫酸铵，0.1％尿素，0.3％磷酸二氢钾，0.05％硫酸镁，0.3％吐温80，121℃灭菌30min。