[发明专利]一种快速提取和分离牡丹种子中脂类成分的方法

说明书

一种快速提取和分离牡丹种子中脂类成分的方法，通过提取牡丹种子中的总脂，将总脂上样至固相萃取硅胶小柱，再分别以氯仿、丙酮和甲醇作洗脱液进行洗脱，获得中性脂、糖脂和磷脂，再对中性脂、糖脂和磷脂分别做进一步展开，从中性脂中分离出三酰甘油，从糖脂中分离出单半乳糖二脂酰甘油、双半乳糖二脂酰甘油和硫代异鼠李糖二脂酰甘油，从磷脂中分离出磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酸、磷酯酰丝氨酸、磷脂酰甘油。本发明能够对牡丹种子油脂中的9种脂类成分进行有效的分离，获得的脂类成分种类丰富，总脂、中性脂、糖脂和磷脂经甲酯化后获得脂肪酸，该方法快速、简单且成本低，为基础研究提供切实可行的分析方法。

技术领域

本发明属于木本植物油料作物领域，具体涉及一种快速提取和分离牡丹种子中脂类成分的方法，仅用少量种子就可以快速高效提取牡丹种子中的脂类成分，进一步分离得到的总脂，并分析其中的组分及含量。

背景技术

富贵吉祥的牡丹，素有“国花”的美誉，是中国传统文化的重要组成部分，其根皮可以入药，其籽油富含不饱和脂肪酸尤其是α-亚麻酸(α-linolenic acid，ALA，18:3^Δ9,12,15)，使得牡丹兼具有观赏、药用和油用价值于一身。近年来，多不饱和脂肪酸的开发已成为功能食品研究的热点之一，而牡丹籽油中饱和脂肪酸含量很低，不饱和脂肪酸含量非常高。若用牡丹籽油与常见食用油(ALA含量少)进行合理调配，开发营养合理且有保健功能的调和油，将让牡丹资源发挥更好的效益，拥有广阔的应用前景。所以，作为新型资源植物而迅速发展的油用牡丹产业，为缓解我国食用油危机、提升我国油用作物产业的品质内涵带来了新的机遇，同时也提出了新的科技挑战。

细胞中的脂肪酸主要通过酯化反应形成复合脂质。甘油脂是脂肪酸与甘油的酯化反应产物，包括贮存脂或膜脂，分为甘油磷脂(phospholipids，PL)、甘油糖脂(glycolipids，GL)和中性脂(neutral lipids，NL)，PL和GL也统称为极性脂。NL包括单酰甘油(monoacylglycerol，MAG)、二酰甘油(diacylglycerol，DAG)和三酰甘油(triacylglycerol，TAG)，而TAG作为有机体能量的主要储存方式。PL和GL是膜脂的主要组分，PL是细胞膜的骨架成分，分布于质膜、内质网、叶绿体、线粒体、高尔基体和核膜等，是细胞的基本结构成分，也是重要的信号分子或前体。PL家族主要包括磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)、磷脂酸(phosphatidyl acid，PA)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)、溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine，LPC)。PC在植物的甘油磷脂中最为普遍存在，并且PA和PC在TAG形成中起关键作用，PC是脂肪酸去饱和及其他修饰的底物，并直接为DAG提供脂肪酸供体形成TAG。另外，GL是叶绿体和类囊体膜的主要成分，在植物光合作用中至关重要，主要包括单半乳糖二脂酰甘油(MGDG)、双半乳糖二脂酰甘油(DGDG)、硫代异鼠李糖二脂酰甘油(SQDG)。

α-亚麻酸属于ω-3系列多不饱和脂肪酸，在人体内不能合成、代谢，必须依靠膳食来获得，饮食中缺少ω-3家族的脂肪酸会导致高血脂、心血管疾病、自身免疫疾病、炎症反应和中枢神经系统疾病等^[6-7]。FAO/WHO推荐饮食中ω-6与ω-3脂肪酸的比例应低于5(FAO&WHO,1994)。普通食物中，鱼油的ALA含量较高，但是环境污染日趋严重，加上渔业资源的不合理捕捞，且素食主义者无法从鱼油中补充ω-3，故不能作为ALA的理想供给者。因此，植物籽油，如油菜(8％)、大豆(7.95％)、核桃(6％)、橄榄油(0.73％)、油茶油(0.54％)、玉米(0.51％)、花生(0.08％)和葵花籽油(0.01％)等逐渐成为ALA的主要供给原料。但是，这些大宗油料作物中ALA含量均很低。