[发明专利]一种蛋白质分离纯化的方法

权利要求书

1.一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、向待分离溶液中添加缓冲溶液和亲水性有机溶剂，搅拌均匀，形成双水相萃取体系，静置后，收集上相萃取液；

S2、将步骤S1收集的上相萃取液经蒸馏回收溶剂后过疏水层析柱，先用平衡液洗脱至无蛋白流出，再用洗脱液梯度洗脱，收集蛋白馏分；

S3、将S2收集的蛋白馏分加入CuSO₄溶液，使Cu²⁺与蛋白充分结合，得到蛋白生物样品上样液；

S4、将步骤S2得到的蛋白生物样品上样液加样至上样口，施加电压开始电泳，电泳结束后，得到凝胶胶条；

S5、将所得的凝胶胶条切下后横放于分离胶上，加入指示剂，进行电泳分离，电泳结束后，取出凝胶依次通过蛋白质洗脱板和分子半透膜分离，回收蛋白质。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述缓冲溶液包含以下组分：

55mmol/LpH为6.6的Tris-HCl，45-110mmol/LDTT(二硫苏糖醇)，1.3-2.4％SDS(m/v)(电泳级)，0.035-0.05％(m/v)溴酚蓝，17-26％(v/v)甘油。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述有机溶剂为天然来源的松节油衍生物。

4.根据权利要求3所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述松节油衍生物为蒎烯的异构、歧化产物。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述分离胶由以下组分制备而成：

丙烯酰胺混合液11％-16％，其中，丙烯酰胺混合液中丙烯酰胺和双甲叉丙烯酰胺质量比为17.55-23.95∶1；

尿素29-37％；3mol/lpH为8.35的三羟基甲烷盐酸(Tris-HCl)缓冲液20-25％；十二烷基硫酸钠(SDS)0.15-0.2％；过硫酸铵0.36-0.82％；

四甲基乙二胺(TEMED)0.038％-0.081％；余量为去离子水。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述蛋白质洗脱板的材料为氯化聚丙烯、聚乙烯或聚苯丙烯中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种蛋白质分离纯化的方法，其特征在于，所述分子半透膜为聚酰胺半透膜、乙酸纤维素半透膜、聚砜树脂半透膜或聚醚砜树脂半透膜中的一种。