[发明专利]瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法

说明书

本发明公开了一种瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法，具体如下：将瘤背石磺解剖后取出内脏，洗净剩余肌肉并搅碎，用石油醚去脂，并用无水乙醇去除石油醚，过滤后烘干至干粉状，称取一定量的干粉，按照一定的固液比加入蒸馏水，调整pH和温度，同时加入胰蛋白酶和中性蛋白酶复合酶解，酶解过程中不断调节溶液pH，反应结束后高温灭活，离心取上清液，冷冻干燥后，即得瘤背石磺肌肉粗蛋白。本发明具有针对性强、操作简便、无污染、条件温和等特点；对瘤背石磺体内活性物质后续研究具有重要意义和科研价值。

技术领域

本发明属于食品加工领域，具体涉及一种瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法。

背景技术

瘤背石磺(Onchidium struma)在江苏沿海及上海又名土海参、海癞子、土鸡等，是软体动物门(Mollusc)腹足纲(Gastropoda)肺螺亚纲(Pulmonata)缩眼目(Stylommatophora)石磺科(Onchidiidae)的一种生物。瘤背石磺的身体表面分布着许多瘤状突起，背部中间有一背眼，可以自由的伸缩，触角顶端的眼没有感光作用，是一种介于海洋和陆地之间的过渡带海洋软体动物。

瘤背石磺的肌肉粗蛋白是瘤背石磺中的有效活性成分之一，瘤背石磺的活体肌肉中含有7种人体必需氨基酸。腹足和外套膜是瘤背石磺的可食部分，两者肌肉中的谷氨酸和甘氨酸的比例为6.51％和4.77，同时还含有铁、钙、锰、铝等矿物质，以及维生素B1、B2等，与一般的植物蛋白相比更容易消化、吸收和利用，营养价值也相对较高，具有抗氧化，抗肿瘤，降血压，调节免疫等功能。在食品，保健品和药品等领域有广泛的应用。

通过对现有文献的检索发现，申请号为201310516990.X的中国发明专利申请公开了一种采用瘤背石磺酶解提取蛋白多肽的方法。首先将干品瘤背石磺粉碎后按比例加入蒸馏水浸泡制成料液；然后调节料液的pH值并按比例加入木瓜蛋白酶搅拌均匀；接着上述料液加温至50～60℃水解蛋白质，蛋白质水解后升温进行灭酶，自然冷却至室温后放入高速离心机离心获得上清液，并按比例加入粉末活性炭搅匀后加温至50～60℃，保温一段时间后过滤去除粉末活性炭；接下来按比例加入β-环状糊精搅匀后升温至65～70℃后保温，自然冷却至室温即获得液态蛋白多肽；将液态蛋白多肽采用真空低温浓缩并真空冷冻干燥后即制得蛋白多肽成品。然而，该方法中步骤繁琐，在操作过程中会对瘤背石磺中的蛋白含量和活性造成损失；酶解时间(5～10h)过长，成本偏高、蛋白酶解率欠佳的同时还容易造成蛋白的损失。并且，该发明专利申请中并未明确指出究竟酶解的是瘤背石磺内脏还是肌肉蛋白，而根据相关文献调查显示，瘤背石磺肌肉蛋白和内脏蛋白所含成分是不同的，因此很有必要分别对两者进行一些研究，而根据(黄金田，瘤背石磺营养成分分析及品质评价)文献，瘤背石磺肌肉中含有大量氨基酸和蛋白质，因此对肌肉蛋白的研究是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供了一种瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明涉及一种瘤背石磺肌肉粗蛋白提取方法，所述方法包括如下步骤：

S1、样品预处理：将瘤背石磺致死后解剖，取出内脏，用蒸馏水洗净剩余部分后搅碎，加入石油醚浸泡去脂，过滤后加入无水乙醇浸泡去除石油醚，过滤洗净后放入烘箱烘干至干粉状，得干粉样品；

S2、肌肉酶解：按照80～100mL·g^-1的固液比，在所述干粉样品中加入蒸馏水，调节pH值为8.5～9.5，加入由胰蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合蛋白酶水浴反应1～3h，所述水浴反应的温度为40～50℃；在高温下灭活，冷却，离心后去除沉淀物，取上清液，冷冻干燥，即得所述瘤背石磺肌肉粗蛋白。

在本发明中，水浴反应时间为1～3h。这是由于根据单因素实验显示，在本发明酶解过程中，最佳时间为2h，而超过3h后酶解效果开始下降，部分酶开始失活。