[发明专利]桃砧木中桃抗砧1号的组培繁殖技术

说明书

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及到桃砧木中桃抗砧1号的组织培养快速繁殖技术。

背景技术

我国桃栽培历史悠久，是世界第一桃生产国，但在桃苗生产上普遍采用野生桃或半野生桃种子的实生苗作为砧木，培育的桃砧木品种很少。用实生苗作砧木，其一致性差、抗性分散，不利于果园的标准化建设和一致性果实品质控制。

砧木品种化是果树砧木发展的重要方向，目前国外桃砧木品种化已取得了重要进展。通过有性杂交聚合亲本优良性状是获得嫁接亲和性良好、抗性强砧木的有效途径。然而，利用杂交获得的砧木品种的种子进行实生繁殖时，其优良性状往往会发生分离，产生不具有砧木优良性状的后代，在生产上利用时，不能进行一致性砧木的标准化生产。采用扦插、组织培养等无性繁殖技术获得砧木的无性系材料，可以很好地解决种子实生繁殖产生的优良性状分离、砧木一致性差等问题。有无配套的无性繁殖技术是限制无性系砧木大量生产与应用的瓶颈。国外无性系砧木GFF677等的普遍应用，其配套的无性繁殖技术功不可没，GFF677已开发出成功的组织培养繁殖技术，能够在短时间内获得大量无性系苗木。然而，在借鉴不同桃组织培养繁殖技术时，材料的基因型差异使得不同基因型的桃砧木要求不同的培养基配方、植物生长调节剂比例和生根条件等。

中桃抗砧1号为中国农业科学院郑州果树研究所培育的抗再植障碍桃砧木新品系，对重茬地具有良好的适应能力。中桃抗砧1号的生产应用有望为我国广大桃产区持续稳定的桃果生产提供良好砧木。然而，该砧木通过种子繁殖存在一定比例的抗性分离和株型分离，其无性繁殖技术取得突破将是其推广应用的关键。目前，除我们开展的研究外，还没有中桃抗砧1号组织培养繁殖无性系苗木的报道。

发明内容

本发明公开了桃砧木中桃抗砧1号的组培繁殖技术，用于中桃抗砧1号的无性系苗木繁殖。该技术针对性强，外植体初代诱导萌芽率达80%以上，增殖培养增殖系数可达2-5，伸长培养壮苗后生根率可达80%以上，炼苗移栽成活率90%左右。该技术可在实验室条件下获得大量中桃抗砧1号无性系苗木，为生产上提供基因型一致的桃抗性砧木。本发明实现上述目的采用以下技术方案：

中桃抗砧1号的组培繁殖技术，它包括以下步骤：

1）外植体的采集与预处理

在桃枝条旺盛生长期，挑选生长旺盛、健康无病虫害10cm长左右的新梢，去除叶子和顶芽，留下0.2-0.3cm长的叶柄，然后用含有洗洁精的自来水清洗枝条表面的灰尘后，将其剪成含有2个嫩芽的小段；在二溴海因溶液中浸泡20min，然后用流水冲洗1-2h，用于初代培养。

2）无菌苗的建立

在超净工作台上，将20个左右的茎段放入500mL的烧杯中，首先加入75%乙醇淹没实验材料，缓慢摇晃30s，迅速将乙醇倒出；然后加入0.1%升汞溶液搅拌4min，最后用无菌水冲洗3次，浸泡1次，浸泡时间为5-10min。将材料放在盛有无菌滤纸的培养皿中，吸干材料表面水分，用无菌手术刀分别切去茎段的基部和顶部0.2cm，然后每个茎段接种在含有初代培养基的试管中进行接种培养。

3）增殖培养

组培材料在增殖培养基Ⅰ上增殖2代，再在增殖培养基Ⅱ上增殖1代，随后再转入增殖培养基Ⅰ，如此循环往复，直到得到所需数量的无根苗。

4）伸长培养

用手术刀片将经过增殖培养的丛生芽基部切一个新切口，转入伸长培养基培养。当这些丛生芽继续生长到长度为1.5cm左右时，从主干枝条上切下，接种在伸长培养基中继续培养3周左右。伸长培养阶段长度低于1.5cm的小芽亦可以转入增殖培养基中进行循环培养。

5）生根阶段

将经过伸长培养的无根组培苗基部切一个新切口，剪去基部侧芽和叶片，接种到盛有生根诱导培养基的培养瓶中，每个培养瓶中放置3-4个待生根苗。先将培养瓶放在组培间内黑暗条件下培养5-7天，再放到组培室的散射光下培养2天，最后回归到正常组培苗培育的光、温条件培养2-3周，待根长出后用于炼苗移栽。

6）温室炼苗移栽

待组培苗生根2-4条，根长1-4cm时，进行组培苗炼苗5-7天，在下午16:00-18:00移栽到装有珍珠岩与腐植土1:1混配的湿润基质的育苗盒中，浇透水，盖上透明保湿罩，上留1个风口，置于湿度60-70%的温室内让其生长成苗。移栽后不定期进行喷水和喷洒杀菌剂杀菌等。