[发明专利]一种快速发现天然产物中低含量活性成分的新方法

权利要求书

1.一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以一种天然来源的植物、动物、微生物、海洋生物或中药复方为对象，制备相应的提取物；

(2)采用常规液相色谱系统与自动组分收集系统联用，建立上述分析对象的全成分色谱指纹图谱条件；

(3)高低含量的划分：采用面积归一化法，将各活性化合物在样品制备色谱图中显示的峰面积，分别与各活性化合物在样品制备色谱图中显示的峰面积的总和相比，得到各活性成分的相对含量。并将各活性成分的相对含量按照从低到高的顺序排序，选择合适的标准将全成分划分为高含量成分和低含量成分；

(4)高含量馏分库的建立：

运行步骤(2)中的色谱指纹图谱条件，通过软件设置各指纹峰的起始时间和结束时间以及收集位置，使组分收集系统的程序根据上述设置，自动、精确地收集各指纹峰；单次进样直接收集高含量成分获得高含量馏分库；

低含量馏分库的建立：

敲除高含量成分之后对低含量成分进行富集，样品经回收溶剂后再次进样，自动、精确收集指纹图谱中的每一个色谱峰，即馏分；

(5)采用串联质谱检测器同步获取高、低含量馏分库的质谱信息进行化合物鉴定；

(6)对每个馏分进行脱溶剂处理，以备后续筛选。

2.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(1)中的天然产物是天然来源的植物、动物、微生物、海洋生物、中药复方的提取物或由其活性导向分离得到的提取物部位。

3.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(2)中的常规半制备型液相色谱系统的色谱条件如下：分离采用的色谱柱内径≤10mm、粒径≤5μm；流速为2mL/min，分析时间≤2h。

4.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(3)中将高低含量成分区别对待，能够避免由于天然产物成分复杂、含量悬殊造成的活性筛选过程中对微量成分的漏筛，减少在制备过程中高含量成分对微量成分的干扰。

5.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(4)中应用高分辨色谱峰馏分库制备方法将高低含量成分分别建库，高含量成分单次进样得到的样品即可满足活性筛选的要求；低含量成分经富集过程，使之成为“高含量成分”，进而满足活性筛选的要求。

6.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(4)中的供筛选的高低含量化合物库适用于细胞、细胞器、蛋白质水平的快速活性筛选；其中化合物库含有几十个至上百个微量样品。

7.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(5)中常规液相色谱-组分收集系统同步联接质谱检测器，同时将液相流出液在线按比例分流进入质谱检测器，对收集得到的各馏分进行纯度检测、结构推测和成分鉴定。

8.如权利要求1所述的一种快速发现天然产物中低含量活性成分的方法，其特征在于，步骤(6)中可采用氮吹、加热或真空离心干燥等方式进行快速脱溶剂处理，以备后续筛选。