[发明专利]一种富硒益生菌中硒形态测定的方法

权利要求书

1.一种富硒益生菌中硒形态测定的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）样品的前处理：取经过研磨的富硒益生菌干样，加入缓冲液中，进行超声提取；

（2）样品破壁酶解：取步骤（1）经过前处理的样品，调节pH值至5-7，然后向其中加入溶菌酶，进行酶解；

（3）样品酶解：将步骤（2）破壁酶解后的样品的pH值调节至1.5-2.5，然后加入胃蛋白酶，进行酶解；

（4）样品分离后再酶解：将步骤（3）酶解后的样品进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测；将离心后的沉淀部分继续加入缓冲液，调节pH值至7.0-8.0，加入胰蛋白酶，然后进行酶解；

（5）样品分离：将步骤（4）经胰蛋白酶酶解后的样品进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测；

（6）上机测定：对步骤（4）和（5）中过水系膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生-原子荧光光谱法联用上机测定样品中的硒形态。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述缓冲液为Tris-HCl缓冲液或磷酸缓冲液，浓度为0.1-0.2mol/L。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述富硒益生菌与缓冲液的质量体积比为0.1~0.2g:5mL。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）中溶菌酶与所述富硒益生菌的质量比为10~50:100~200，酶解温度为30-50℃，酶解时间为12~18h。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（3）中胃蛋白酶与所述富硒益生菌的质量比为20~50:100~200，37℃恒温酶解18~24h。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述富硒益生菌与缓冲液的质量体积比为0.1~0.2g:5mL，胰蛋白酶与所述富硒益生菌的质量比为20~50:100~200，37℃恒温酶解18~24h。

7.根据权利要求1~6任一项所述的方法，其特征在于，所述富硒益生菌是指经过液体深层富硒发酵培养得到的富硒益生菌，总硒含量在10~1500mg/kg。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述富硒益生菌为富硒嗜酸乳杆菌、富硒嗜热链球菌、富硒保加利亚乳杆菌或富硒双歧杆菌。