[发明专利]检测RNA G-四链体的方法

说明书

本发明提出了一种检测RNA G‑四链体的方法，所述方法包括将待测样品与菁染料接触，以便得到混合溶液，对所述混合溶液进行颜色观察或光谱分析(包括紫外吸收光谱分析和荧光光谱分析)，基于所述混合溶液颜色的变化或光谱分析结果，确定待测样品中是否存在RNA G‑四链体。本发明提出的检测RNA G‑四链体的方法具有操作简便、灵敏度高、准确度高的特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种检测RNA G-四链体的方法。

背景技术

RNA G-四链体是由富含鸟嘌呤的RNA序列形成的二级结构，该结构的基本单元为四个鸟嘌呤碱基通过Hoogsteen氢键形成的G-tetrad平面结构，并通过多个G平面的堆积，形成独特的G-四链体结构。在人类的转录基因的研究中发现，许多与恶性肿瘤发生发展关系密切的基因(如NRAS、ZIC1、MT3-MMP、NCAM2、BCL-2、TRF2、FGF-2、VEGF等)，其转录产物mRNA的5’-UTR可形成大量的RNA G-四链体结构，研究表明这些RNA G-四链体在蛋白质的翻译过程中有重要的调控作用，因此，准确有效地检测RNA G-四链体结构对于抗肿瘤药物设计以及恶性肿瘤的早期检测都具有非常重要的意义。

然而，对RNA G-四链体的检测方法有待进一步开发。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

本发明是基于发明人对下列问题和现象的发现而完成的：

现有检测RNA G-四链体的方法，如利用RNA G-四链体的CD光谱特性及G-四链体的亚氨基氢NMR谱特性来检测RNA G-四链体的存在，RNA G-四链体和其他RNA结构的CD光谱，差异较小，难以简单区分，然而NMR谱识别RNA G-四链体需要足够量的RNA G-四链体，RNA序列价格昂贵、合成困难，因此，该方法也大大限制了其使用范围。

而菁染料是一种常用染料，具有独特的光敏感性质。

基于对现有技术问题的发现和菁染料独特光敏特性的认识，发明人提出了一种利用菁染料检测RNA G-四链体的方法，该方法灵敏度高而且操作简便。

在本发明的第一方面，本发明提出了菁染料在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测RNA G-四链体。根据本发明的实施例，利用菁染料检测RNA G-四链体，可以将菁染料聚集体紫外吸收峰小于0.01、菁染料聚单体紫外吸收峰大于0.05、菁染料单体荧光发射峰与预定参数相比高200～1200倍或混合溶液颜色为粉红色作为RNA G-四链体的指示，利用菁染料检测RNA G-四链体具有灵敏度高、操作简便特点。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种确定待测样品中是否存在RNA G-四链体的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)将待测样品与菁染料接触，以便得到混合溶液，所述待测样品被预先确定含有RNA；(2)对所述混合溶液进行紫外吸收光谱分析；以及(3)基于所述紫外吸收光谱分析结果，确定所述待测样品中是否存在RNA G-四链体，其中，所述紫外吸收光谱分析结果中菁染料聚集体特征峰小于0.01是所述待测样品中含有RNAG-四链体的指示。所述菁染料聚集体特征峰在628nm～668nm。在紫外吸收光谱分析中，上述的菁染料聚集体特征峰为菁染料聚集体吸收峰。根据本发明的实施例，RNA G-四链体可以使菁染料聚集体解聚为单体，菁染料聚集体特征峰(菁染料聚集体吸收峰)小于0.01可作为待测样品中含有RNA G-四链体的显著判定指标，本发明所提出确定待测样品中是否存在RNA G-四链体的方法具有准确度高、灵敏度高、操作简便的特点。

根据本发明的实施例，上述确定待测样品中是否存在RNA G-四链体的方法还可以进一步具有下列附加技术特征至少之一：