[发明专利]含海藻糖的稳定化因子IX制剂

说明书

本申请是申请日为2008年12月16日的题为“含海藻糖的稳定化因子IX制剂”的中国专利申请No.200880122207.9的分案申请。

相关申请

本发明要求享有于2007年12月21日提交的美国临时申请No.61/016,230的优先权，将其结合于本文中作为参考。

联合研究协议的各方

这项工作是作为InspirationBiopharmaceuticals,Inc.和ICOSCorp.之间的研究协议的结果而产生的。

技术领域

本发明的实施方式涉及在冻干和储存期间蛋白质结构和活性的稳定化，具体而言，涉及凝血因子如因子IX的稳定化。

背景技术

因子IX是参与凝血途径的单链糖蛋白。因子IX是一种含有氨基末端信号肽和前原(prepro)前导序列(二者在分泌进入循环系统之前断裂)以及负责Ca²⁺结合的Gla结构域的结构复杂分子(或结构性配分子，structurallycomplexmolecule)。钙结合通过结合至凝血活性所需的蛋白以及诱导其构象变化而在因子IX功能中发挥重要作用。钙结合导致之前埋藏的疏水结合位点暴露，这些结合位点有利于结合至有效凝血的磷脂。为了产生活性蛋白，维持因子IX的钙结合性质是必要的。一旦活化肽被切割，则单链因子IX变成活化的酶因子IXa，一种经由链间二硫键连接的双链糖蛋白。另外，该分子含有多个N和O-连接的糖基化位点。因子IX的缺乏导致B型血友病，对该病目前可利用多种疗法，包括一种因子IX的重组形式，和其来源于人体血浆。

的制剂由组氨酸、甘露醇、氯化钠和聚山梨醇酯80组成。这些主要是已知在冷冻期间表现出共晶转变(eutectictransition)(结晶行为)的赋形剂。然而，制剂不含防冻剂或稳定剂，仅有缓冲剂、疏松剂(或蓬松剂，bulkingagent)、等张剂和表面活性剂。因此，在冷冻、冻干和随后的储存期间，该蛋白相对地未进行物理保护且由于暴露于冰、水和空气而产生变性效应。这里解决的技术问题是一种改良的因子IX制剂，其中改善了冷冻、冻干和储存期间的稳定性。本发明的发明人已经发现，在冷冻、冻干和储存期间，在因子IX组合物中包含海藻糖稳定了因子IX的钙结合能力并维持了这种纯化蛋白的生物活性。

发明内容

本发明的实施方式涉及包含因子IX和海藻糖的冻干组合物。优选地，海藻糖以在冻干和25℃下储存6个月期间足以保留超过90％的因子IX的钙结合性质的量存在。

优选地，海藻糖按体积计以0.5～3％的量存在。且更优选地，海藻糖按体积计以1～2％的量存在。

在一些优选实施方式中，该组合物包含作为缓冲剂的组氨酸。在一些优选实施方式中，该组合物包含甘露醇。在一些优选实施方式中，该组合物包含氯化钠。在一些优选实施方式中，该组合物包含聚山梨醇酯80。

在一个最优选的实施方式中，组合物包含因子IX和海藻糖，并另外地包含浓度为5～20mM的组氨酸、按体积计浓度为2～5％的甘露醇、浓度为50～80mM的氯化钠、和按体积计浓度为0.001～0.005％的聚山梨醇酯80。

本发明的实施方式涉及制备因子IX的稳定干燥组合物的方法，该方法通过混合含有因子IX和海藻糖的溶液以获得一种防冻溶液并冷冻干燥该防冻溶液而获得因子IX的稳定干燥组合物。优选地，因子IX的干燥组合物在25℃下储存6个月后保留超过90％的钙结合活性。

优选地，海藻糖按体积计以0.5～3％的量存在。而更优选地，海藻糖按体积计以1～2％的量存在。

在一些优选实施方式中，所述溶液包含作为缓冲剂的组氨酸。在一些优选实施方式中，所述溶液包含甘露醇。在一些优选实施方式中，所述溶液包含氯化钠。在一些优选实施方式中，所述溶液包含聚山梨醇酯80。

在一个最优选的实施方式中，所述溶液包含因子IX和海藻糖并另外地包含浓度为5～20mM的组氨酸、按体积计浓度为2～5％的甘露醇、浓度为50～80mM的氯化钠、和按体积计浓度为0.001～0.005％的聚山梨醇酯80。

优选地，冷冻干燥操作包括一个退火步骤。

本发明的实施方式涉及通过包括以下步骤中的一个或多个的方法冻干包含因子IX和海藻糖的药物制剂的方法：

(a)在-40℃或更低的温度下冷冻包含因子IX和海藻糖的药物制剂；

(b)在约-20℃和-35℃之间退火该药物制剂；

(c)将该药物制剂的温度降低至-40℃或更低；