[发明专利]一种积累乙酰氨基葡萄糖的重组枯草芽孢杆菌及其应用在审
| 申请号： | 201510661135.7 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN105176903A | 公开（公告）日： | 2015-12-23 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;堵国成;李江华;徐小芳;刘延峰;马文龙 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12P19/26;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 积累 乙酰 氨基 葡萄糖 重组 枯草 芽孢 杆菌 及其 应用 | ||
1.一种积累乙酰氨基葡萄糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，是以枯草芽孢杆菌BSGN6-PxylA-glmS为出发菌株，表达了外源氨基葡萄糖乙酰化酶的编码基因CeGNA1。
2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌BSGN6-PxylA-glmS是以枯草芽孢杆菌168为基础，基因型作如下改造得到的：(1)ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔpta::lox72，(2)以木糖诱导启动子PxylA调控表达氨基葡萄糖合成酶基因glmS。
3.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因为秀丽隐杆线虫来源，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
4.权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以pP43NMK为表达载体表达氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因。
5.一种构建权利要求1-4任一所述重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)构建重组质粒
将核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因连接到载体pP43NMK得到重组表达载体；
2)构建产乙酰氨基葡萄糖重组枯草芽孢杆菌
将上述重组表达载体转化枯草芽孢杆菌BSGN6-PxylA-glmS，得到积累乙酰氨基葡萄糖的重组枯草芽孢杆菌。
6.应用权利要求1-4任一所述重组枯草芽孢杆菌发酵生产乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，将37℃、200rpm下培养12h的重组枯草芽孢杆菌以5％的接种量转入发酵培养基，于37℃、200rpm条件下发酵30h。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基按每L计含有：玉米浆干粉20g，酵母粉20g，K2HPO4·3H2O12.5g，KH2PO42.5g，CaCO35g，微量元素溶液15ml；微量元素溶液按g/L计含有：MnSO4·5H2O1.0，CoCl2·6H2O0.4，NaMoO4·2H2O0.2，ZnSO4·7H2O0.2，AlCl3·6H2O0.1，CuCl2·H2O0.1，H3BO40.05，含5MHCl。
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