[发明专利]一种鲜味肽亲和柱的制备方法在审
| 申请号： | 201510661351.1 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN105381631A | 公开（公告）日： | 2016-03-09 |
| 发明（设计）人： | 党亚丽;高新昌;包国良;李青青;吴庆其 | 申请（专利权）人： | 浙江省医学科学院 |
| 主分类号： | B01D15/38 | 分类号： | B01D15/38;B01D15/20;C07K1/22 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鲜味 亲和 制备 方法 | ||
1.一种鲜味肽亲和柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用基因重组方法合成T1R1基因和T1R3基因，T1R1的基因序列如SEQIDNO.1所示，T1R3基因序列如SEQIDNO.2所示；
(2)受体蛋白T1R1、T1R3的制备：将步骤(1)得到的T1R1基因和T1R3基因，分别亚克隆至pcDNA3.1(+)[EF550208.1]载体，并采用哺乳动物细胞进行表达，His纯化，得到受体蛋白T1R1和受体蛋白T1R3。
(3)亲和柱的制备
(3.1)将12g经溴化氰(CNBr)活化后的琼脂糖干胶悬浮于120mL浓度为1mmol/L的HCl溶液中溶涨，砂芯漏斗中抽洗15min。滤出固体，用蒸馏水反复冲洗至中性，于70℃条件真空干燥8h。
(3.2)将步骤2得到的受体蛋白T1R1和T1R3按照质量比1:1混合，溶解于300mL偶联缓冲液中，受体蛋白T1R1的质量分数为2.5％；再加入步骤(3.1)处理后的琼脂糖干胶，在37℃搅拌1h；然后用偶联缓冲液洗去未偶联的受体蛋白，收集偶联的T1R1/T1R3受体蛋白产物；所述偶联缓冲液中含有0.1mol/L的NaHCO3，0.5mol/L的NaCl，偶联缓冲液的pH为8.3。
(3.3)在步骤(3.2)收集的偶联受体蛋白产物中加入5-10倍蛋白产物体积的0.1mol/L的Tris-HCl封闭缓冲液(pH8.0)，室温下振荡反应2h，形成封闭后的偶联受体蛋白产物。
(3.4)用约5倍琼脂糖干胶体积的0.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.0，含0.5mol/LNaCl)和约5倍琼脂糖干胶体积的0.1mol/LTris-HCl(pH8.0，含0.5mol/LNaCl)先后交替洗涤步骤(3.3)封闭后的偶联受体蛋白产物。
(3.5)用PBS缓冲液(pH7.4)悬浮步骤(3.4)洗涤后的产物，装入50mm×10mm柱管中，至胶的高度为75mm，用PBS平衡琼脂糖胶，封住口底，冰箱4℃保存，得到鲜味肽亲和柱。
2.根据权利要求1所述的鲜味肽亲和柱的制备方法，其特征在于，步骤(3.5)中，亲和柱的上样条件：pH7.2，流速3mL/min，洗脱条件：0.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.0，含0.5mol/LNaCl)。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江省医学科学院，未经浙江省医学科学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510661351.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
