[发明专利]检测葫芦科种子携带黄瓜绿斑驳花叶病毒的样品制备方法及用途

权利要求书

1.一种检测葫芦科种子携带黄瓜绿斑驳花叶病毒的样品制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）种子样品种仁和种壳的分离：将每颗葫芦科种子用眼科剪刀沿侧面剖开，剥除种仁部分，收集剩余的种壳；

2）样品的研磨：以1粒种子分离的种壳作为1个样品放入已放3-5颗直径2.5mm实心钢珠的1.5-2ml eppendorf离心管中，盖上离心管盖子，在离心管上做好标记后将其丢入液氮中冷冻处理1分钟后捞出，然后放入上海净信实业发展有限公司货号为Tissuelyser-48的全自动样品快速研磨仪中以频率60HZ研磨60秒，使样品呈粉末状，如果样品没有呈粉末状可重复研磨一次；

3）黄瓜绿斑驳花叶病毒的粗提取：研磨好的样品中加入0.1-1ml pH为7.4且浓度为0.01 mol/L PBS磷酸盐缓冲液，在Scientific Industries 公司的VortexGenie2涡旋混合器上混匀0.5-5分钟，然后5000rpm离心3分钟后取上清液作为黄瓜绿斑驳花叶病毒的粗提取液进行血清学方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒；

或黄瓜绿斑驳花叶病毒RNA的提取：研磨好的样品中加入1mlTRIzol试剂后用常规TRIzol试剂法提取病毒RNA，提取的病毒RNA用于黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子检测。

2.一种如权利要求1所述方法制备的样品的用途，其特征在于该方法制备的黄瓜绿斑驳花叶病毒的粗提取液和RNA分别用于葫芦科种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒的血清学和分子方法检测。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的血清学方法包括dot-ELISA、ACP-ELISA、DAS-ELISA和TAS-ELISA。

4.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的分子方法检测包括定量RT-PCR。