[发明专利]一种用于筛选靶向基因编辑植株的方法有效
| 申请号： | 201510663085.6 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN105256020A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 李珊;舒庆尧 | 申请（专利权）人： | 无锡哈勃生物种业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙) 32260 | 代理人： | 张欢勇 |
| 地址： | 214196 江苏省无锡市锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 筛选 靶向 基因 编辑 植株 方法 | ||
1.一种用于筛选靶向基因编辑植株的方法，其特征在于，包括：
(1)以未经编辑的作物植株为对照植株，以经靶向基因编辑获得的作物植株为待测植株，分别提取待测植株的基因组DNA和对照植株的基因组DNA；
(2)根据与所述靶向基因编辑的靶位点相邻的基因组序列来设计引物，以所提取的基因组DNA为DNA模板，加入所述引物和荧光染料，PCR扩增所提取的基因组DNA中包含编辑位点的DNA片段，所述DNA片段长度为200～500bp；
(3)PCR扩增完毕后直接进行高分辨率熔解曲线分析，以对照植株所对应的高分辨率熔解曲线为基准线，比较待测植株所对应的高分辨率熔解曲线与对照植株所对应的高分辨率熔解曲线的最大荧光差异△F，若|△F|<0.05，视为待测植株与对照植株的结果相同，判定该待测植株未成功进行编辑；若|△F|≥0.05，视为待测植株与对照植株的结果不同，判定该待测植株编辑成功。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶向基因编辑是CRISPR/Cas编辑。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述作物植株为水稻植株、玉米植株或大豆植株。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA模板为直接提取的单株待测植株DNA。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA模板是摩尔比为1:1的待测植株的基因组DNA和对照植株的基因组DNA的混合。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA片段为200～400bp。
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