[发明专利]一种可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用

权利要求书

1.一种可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用，其特征在于，采用原生质体的遗传转化方法，将带有绿色荧光蛋白标记的表达质粒载体pCT74-GFP转入玫烟色拟青霉菌株FZ01基因组中，获得可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP；

所述FZ01-GFP生防菌株应用于靶标害虫流行病学中的具体过程为：释放所述FZ01-GFP生防菌株，定时定点采集、记录靶标害虫数量，收集罹病害虫样本，通过质粒载体pCT74-GFP的一对特异引物对罹病样本进行PCR分子检测鉴别，分析数据，确定生防菌FZ01-GFP对靶标害虫侵染的发生规律和流行趋势。

2.根据权利要求1所述可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用，其特征在于，定时定点采集、记录靶标害虫数量，并收集罹病害虫样本的具体步骤为：

每处理固定5点，每点连续调查3株，总计15株，在早晨成虫活动不活跃时，检查每植株3片叶片的背面，每周固定同一天调查虫口情况，记录靶标害虫数量，收集罹病害虫样本。

3.根据权利要求1所述可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用，其特征在于，所述对罹病样本进行PCR分子检测的特异引物如SEQIDNO.1-2所示：

SEQIDNO.1：5′-TAGTGGACTGATTGGAATGCATGGAGGAGT-3′；

SEQIDNO.2：5′-GATAGAACCCATGGCCTATATTCATTCAAT-3′。

4.根据权利要求1所述可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用，其特征在于，所述PCR分子检测鉴别的具体步骤包括：

(1)单头样品DNA提取；

(2)PCR扩增：PCR反应体系20μl，包括2.0μl10×PCR反应缓冲液，各0.5μl10μmol/L所述引物，和2μl模板DNA，ddH₂O补足20μl；PCR反应条件为：94℃预变性2min；94℃变性30sec，53℃退火30sec，72℃延伸40sec，共33个循环；72℃延伸5min；

(3)将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上检测，根据扩增产物的有无和片段大小判定结果，进一步鉴定致死病因。

5.根据权利要求1所述可表达GFP的生防菌株FZ01-GFP在靶标害虫流行病学中的应用，其特征在于，鉴定致死病因的标准为：特异性地扩增出417bp条带时，判断靶标害虫死亡病因为生防菌株FZ01-GFP侵染致死，无417bp条带则判断为非FZ01-GFP生防菌侵染。