[发明专利]一种研究口炎清制剂抗炎药效组方配伍关系的方法

权利要求书

1.一种研究口炎清制剂抗炎药效组方配伍关系的方法，所述口炎清制剂由组分山银花、玄参、天冬、麦冬和甘草制成，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在口炎清制剂的组方配比的约束下，以各组分质量百分含量为因素，采用均匀设计方法构建具有各组分不同投料比例，符合统计要求的若干差异样品；

(2)构建与口炎清制剂药效对应的体外炎症模型，进行差异样品药效学实验，检测其对促炎因子TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β的影响，获得相关药效数据；所述的体外炎症模型构建方法为：将人口腔黏膜角化细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640完全培养基中，在37℃、5％CO2培养箱中孵育；用含10％胎牛血清的培养液配成单个细胞悬液，接种到孔板；培养24h，待细胞长至80％密度时，以含对照标准品或供试品的无胎牛血清培养基替换原培养基，预处理30分钟后用6％的香烟提取物刺激人口腔表皮样癌细胞造模，继续孵育24小时，终止培养，用孔内上清液进行检测所述炎症因子的水平；

(3)利用灰色关联分析方法计算差异样品组分含量与药效间的关联性，明确各组分对药效作用及其主次关系，筛选最优的配伍关系。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述香烟提取物的制备方法为：抽取适量充分燃烧的香烟烟雾，使其完全溶于无血清RPMI-1640培养基，用0.22μm滤膜过滤，除菌，制备100％香烟烟雾提取物。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：检测促炎症因子的方法为Elisa试剂盒检测法。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述最优的配伍关系是由于山银花组分与TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β4个药效指标间的关联度显著大于其余组分，应以山银花发为君药；由于组分玄参、天冬和麦冬与IL-6和IL-1β指标关联密切，与调节多种炎症细胞的增殖、分化及迁移，以及促进白细胞迁移和黏附分子表达、引起炎症介质的释放相关；甘草与TNF-α指标关联密切，与诱导IL-1β、IL-6细胞因子及炎性介质的产生、促进炎细胞向病变组织移行相关，确认组分玄参、天冬、麦冬和甘草通过相互补充，起到增强山银花药效的作用。