[发明专利]一种有效提高建库效率的非对称高通量测序接头及其应用

权利要求书

1.一种有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的接头由两条DNA寡核苷酸单链组成；

所述的接头序列为：

P1-A：5’CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT3’

PY-2：3’GACGGGGCCCAAGGAGTAAGACCGTCAGCCACT(PO₄)5’。

2.根据权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头的P1-ADNA单链3’端为突出末端T，其中T为胸腺嘧啶。

3.根据权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的接头的PY-2单链5’端用磷酸基团修饰。

4.根据权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的接头的制备方法如下：

将所述的P1-A和PY-2两条DNA寡核苷酸单链溶于无酶水，分别取P1-A单链(100μM)和PY-2单链(100μM)40μl于200μl薄壁PCR管中，加入10μl的10×PCRBuffer和10μl无酶水，经过下列程序退火：95℃，5min；72℃，5min；60℃，5min；50℃，3min；40℃，3min；30℃，3min；20℃，3min；10℃，3min；4℃保存，即得到终浓度为40μM的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头溶液。

5.根据权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的接头中单链P1-A的序列与P1接头的其中一条单链的序列一致，其中P1接头为SOLiD测序系统中构建DNA文库所用接头；

上述的P1接头序列为：

P1-A:5’CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTGAT3’

P1-B:3’TTGGTGATGCGGAGGCGAAAGGAGAGATACCCGTCAGCCACTA5’。

6.根据权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头，其特征在于：所述的接头的PY-2单链中下划线标记部分序列(3’-5’方向)与P2接头中的P2-B单链中下划线标记部分序列(3’-5’方向)一致，横线后面的序列为与P1-A单链对应的互补序列，其中P2接头为SOLiD测序系统中构建DNA文库所用接头；

上述的P2接头序列为：

P2-B：5’AGAGAATGAGGAACCCGGGGCAGTT3’

P2-A：3’TCTCTTACTCCTTGGGCCCCGTC5’。

7.一种应用权利要求1所述的有效提高建库效率的非对称高通量测序接头的建库方法，其特征在于：所述的建库方法采用以下步骤：

a)对源基因组DNA进行片段化处理；

b)回收实验所需的DNA片段；

c)对回收的DNA片段进行末端修复并纯化；

d)对已经末端修复的DNA片段在3’端进行加A处理并纯化，其中A为腺苷酸；

e)对已经在3’端进行加A处理的DNA片段进行接头连接并纯化；

f)对已经完成接头连接的DNA片段再一步进行片段选择(此步可省略)；

g)对选择的片段(或接头连接之后的DNA片段)进行PCR扩增并对PCR产物纯化，对已构建的DNA测序文库进行质控；

h)质控过后的文库进行emPCR(EmulsionPCR),完成之后在SOLiD测序系统上进行测序。

8.根据权利要求7所述的一种应用有效提高建库效率的非对称高通量测序接头的建库方法，其特征在于：其所述的基因组DNA来源于植物、动物或微生物。

9.根据权利要求7所述的一种应用有效提高建库效率的非对称高通量测序接头的建库方法，其特征在于：测序平台为SOLiD高通量测序仪。