[发明专利]一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚A的方法有效
申请号: | 201510669380.2 | 申请日: | 2015-10-19 |
公开(公告)号: | CN105233458B | 公开(公告)日: | 2018-11-06 |
发明(设计)人: | 刘红艳;张飞;王秀丽;马钰;李柏林 | 申请(专利权)人: | 桂林理工大学 |
主分类号: | A62D3/02 | 分类号: | A62D3/02;C02F3/34 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 541004 广*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 真菌 粗酶液 降解 方法 | ||
1.一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚A的方法,其特征在于具体步骤为:
(1)制备培养基
向三角瓶内加入10.0~20.0克的葡萄糖、1.0~2.0克吐温80、2.0~3.0克磷酸二氢钾、0.5~1.0克硫酸镁、1.0~2.0克氯化钙、0.001克维生素B1、0.5~2.0克氯化钠、0.2~1.0克硫酸锰和1.0~3.0mL微量元素混合溶液,定容至0.05~1.5升,在1.103MPa、121℃条件下灭菌20分钟,制得限氮液体培养基备用;
(2)白腐真菌粗酶液的制备
按照体积比为1:9量取孢子悬液和步骤(1)制得的限氮液体培养基,将孢子悬液接种于限氮液体培养基中,在25~40℃、100~200转/分钟的条件下置于振荡培养箱中悬浮培养5~7天,所得培养液在烧杯中缓缓研磨,破碎后得到的细胞匀浆培养液经冷冻离心机在4℃、8000转/分钟的条件下离心5~15分钟,取上清液,然后用无菌的0.45μm滤膜过滤,过滤后的滤液置于半透膜中,室温取流动水透析12小时,然后分子量10-kDa超滤浓缩,得到的透析液即为白腐真菌粗酶液,置于4℃的冰箱中保存,备用;
(3)双酚A的降解
称取1.0~3.0mL浓度为250mmol/L的酒石酸缓冲液加入准备好的已灭菌的三角烧瓶中,然后置于30℃恒温水浴中,再加入1.0~3.0mL步骤(2)制得的白腐真菌粗酶液、5mL浓度为0.20mmol/L的双酚A溶液、0.5~2.0mL浓度为0.4mmol/L的双氧水和藜芦醇,控制反应体系的pH值为4,反应体系中藜芦醇浓度为10mmol/L,反应30~50分钟,加入1.0~3.0mL甲醇终止反应,即实现利用白腐真菌粗酶液降解双酚A。
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