[发明专利]一种牛肌肉增强子及其应用

权利要求书

1.一种牛肌肉增强子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。

2.用于扩增权利要求1所述增强子的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示。

3.含有权利要求1所述增强子的载体。

4.含有权利要求1所述增强子的重组质粒。

5.权利要求4所述重组质粒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将权利要求1所述的增强子和pGL3-promoter载体用BamHI和SalI限制性内切酶酶切；

2)电泳后切胶回收酶切产物；

3)将增强子序列和pGL3-promoter载体用T4连接酶连接过夜；

4)将连接完成的产物转化大肠杆菌，涂板后倒置培养；

5)挑取单克隆，在LB培养板中划线，倒置培养，通过PCR和琼脂糖凝胶电泳检测进行菌体鉴定；

6)对PCR阳性菌落进行DNA测序；

7)将符合预期的菌落转接到LB培养基中，摇床培养；

8)使用去内毒素质粒DNA制备试剂盒制备得到重组质粒。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将权利要求1所述的增强子和pGL3-promoter载体用BamHI和SalI限制性内切酶酶切；

2)电泳后切胶回收酶切产物；

3)将增强子序列和pGL3-promoter载体于4℃用T4连接酶连接过夜；

4)将连接完成的产物转化大肠杆菌，涂板后，37℃倒置培养12h；

5)挑取单克隆，在LB培养板中划线，37℃倒置培养8h后，通过PCR和琼脂糖凝胶电泳检测进行菌体鉴定；

6)对PCR阳性菌落进行DNA测序；

7)将符合预期的菌落转接到LB培养基中，在37℃摇床220rpm进行培养；

8)使用去内毒素质粒DNA制备试剂盒制备得到重组质粒。

7.权利要求1所述增强子在增强启动子转录活性方面的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将权利要求3所述载体或权利要求4所述的重组质粒转入成肌细胞中。