[发明专利]RRM1基因表达量荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种人RRM1基因荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。

(二)背景技术

核糖核苷酸还原酶(ribonucleotidereductase，RR)是DNA合成通路中的限速酶，它能逆转二磷酸核苷酸为二磷酸脱氧核苷酸，后者是DNA合成和修复必不可少的底物。RR包括2个亚单位：M1和M2。M2亚单位携带接触抑制区，控制底物转化；M1亚单位(RRM1)控制底物的特异性和整个酶的活生。RRM1mRNA有19个外显子，其编码的蛋白质含有792个氨基酸，分子量为85kDa，由一个活性位点与三个相互独立的变构位点构成。RRM1基因定位于染色体11q15.5区域着丝粒部分，该区域常出现恶性肿瘤的杂合子缺失(lossofheterozygosity，LOH)，被称为LOH11A，与恶性肿瘤的侵袭、转移关系密切。研究已发现多种恶性肿瘤(如乳腺癌、胃癌和食管癌等)存在11q15.5的杂合性缺失。在对非小细胞肺癌(NSCLC)的研究中发现，有75％的患者存在这种杂合性缺失，其中88％的非小细胞肺癌、57％的鳞癌和40％的腺癌存在这种杂合性缺失。

通过对小鼠的纤维母细胞进行研究发现，RRM1可以抑制纤维母细胞的侵袭及转移，是一种具有肿瘤抑制功能的基因，其抑癌功能主要是通过诱导位于10号染色体的同源丢失性磷酸酶—张力蛋白基因(phosphataseandtensionhomologydeletedonchromosometen,PTEN)的转录及表达水平和降低局部粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的磷酸化水平来发挥。同时，也可以通过诱导脱氧核苷酸和磷酸酶来控制细胞增殖，阻止细胞发生迁移、浸润和转移。当XRCC1,RRM1等修复基因切除DNA链中的受损部分后，RRM1不但可以给DNA连接酶提供脱氧核糖核苷酸来填补DNA链上留下空缺。此外，它还可以借助RRM1/P53R2损伤修复途径来提高DNA的修复能力。

在对RRM1转基因小鼠肺癌细胞系及结肠癌细胞系的研究中，发现RRM1可以诱导细胞周期的改变而使其停滞于G2期，并参与细胞凋亡及DNA的损伤及修复，且RRM1高表达的小鼠对肿瘤的抑制作用比RRM1低表达的小鼠更强大。研究显示，非小细胞肺癌的癌组织中RRM1阳性表达率明显高于癌旁组织，而且RRM1低表达(mRNA水平)患者的中位生存时间比RRM1高表达(mRNA水平)患者的中位生存时间长(13.9个月vs10.9个月，P＝0.039)，而且RRM1蛋白阳性表达的患者的总体生存期明显短于阴性表达的患者(5.1个月vs12.9个月，P＝0.022)。分析发现RRM1的表达是肿瘤分期、体力状态和体重减轻之外的另一个独立预测因素。因此，有人认为RRM1是生物学上和临床NSCLC恶性行为的重要决定因子，可为临床决策增加一个重要的判断信息。