[发明专利]一种鸡白细胞抗菌肽的制备方法

权利要求书

1.一种鸡白细胞抗菌肽的制备方法，其特征在于：它包括以下具体步骤：

（1）鸡白细胞的采集：每只鸡腹腔内注入0.5g/L酪蛋白生理盐水200mL,6~8h后,放血处死,收集富含白细胞的腹水,肝素抗凝,，经6层纱布过滤除去杂质,2000r/min离心15min,弃上清液,收集白细胞,PBSX液洗涤2次后,用冷却的去离子水裂解残留红细胞,镜检,至无红细胞为止；

（2）萃取：将白细胞中加入10％的醋酸，用料理机进行搅打破碎，60Hz超声波破碎细胞4×60s后染色镜检白细胞是否破碎，若未破碎，重复进行破碎，至镜检无完整细胞；4℃、15000r/min离心20min，收集上清液即为异嗜性粒细胞胞浆内的颗粒组份；4℃下搅拌过夜，萃取得醋酸提取物；

（3）脱酸：将以上方法萃取得到的醋酸提取物，经4℃、15000r/min离心20mi，收集上清液，旋转蒸发除去醋酸和部分水分后，真空冷冻干燥得抗菌肽粗品，密封包装后在-20℃保存；

（4）抗菌肽的纯化：将冻干抗菌肽粗品用0.5%甲醇溶解,再上样于层析柱，同时打开柱的下端出口，收集特征峰洗脱液再真空冷冻干燥得抗菌肽，-20℃保存。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（3）所述的旋转蒸发是55℃旋转蒸发30min。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（4）所述的层析柱是葡聚糖凝胶SephadexG25。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（4）所述的特征峰洗脱液是指在280nm处有吸收峰的洗脱液。

5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（3）、（4）所述的真空冷冻干燥得温度为-50～-60℃，冷冻干燥的时间为24h-48h。