[发明专利]一种茯苓速生菌种及其制备方法

权利要求书

1.一种茯苓速生菌种及其制备方法，其特征在于，茯苓菌种生产工艺中的试管种野生选育，一级种子悬浮培养，二级种子液体培养，三级种子生料木棒发菌培养。

2.根据权利要求1所述的茯苓速生菌种的制备方法，包括如下步骤：

一级培养：在一级培养基中接入茯苓母种，于28－30℃条件下培养96－100小时，得到一级种子液，所述一级培养基的配方以重量百分比的含量计为：土豆20－25%、葡萄糖2－2.5%、磷酸二氢钾0.2－0.3%、硫酸镁0.15－0.2%、余量为水、维生素B11－2片/L；

二级培养：将所述一级种子液按培养基体积10－15%的接种量接入到二级培养基中，于28－30℃条件下培养96－100小时，得到所述茯苓种子液，所述二级培养基的配方以重量百分比的含量计为：葡萄糖2－2．5%、红糖2.5－3%、磷酸二氢钾0.2－0.3%、硫酸镁0.15－0.2%、玉米浆2.5－3%、酵母膏2－2.5%、余量为水、维生素B11－2片/L。

3.根据权利要求2所述的茯苓速生菌种的制备方法，其特征在于，步骤302二级液体种接入到三级固体种的发菌条件为：无菌接种二级液体种；接种量为30－40%，培育温度为28－30℃，培育时间为4-6天，菌丝长满料面。

4.根据权利要求2所述的茯苓速生菌种的制备方法，其特征在于：

选用新鲜、干燥的松段木，其标准：长15-18mm、直径6-8mm，经太阳暴晒干燥后，要求严格灭菌、消毒，在无菌室无菌接种二级液体种；按步骤303接种量为30－40%，培育温度为28－30℃，培育时间为4-6天，菌丝长满料面，得茯苓速生菌种。

5.根据权利要求2所述的茯苓速生菌种的制备方法，包括如下步骤：

茯苓速生菌种的菌株选择和培养：根据生物遗传、变异、选育新品种的基本原理和地域环境要求，针对性地遴选茯苓速生菌种的菌株，从中选育出茯苓速生菌种的优良品种；选择选择苓体均匀结实、色红、苓皮薄、香气浓郁、质量好的野生茯苓，在24-28℃条件下进行组织培养，在气温24℃-26℃，空气湿度70%-80%时，用无菌刀拔去茯苓表皮，取一小片实体，分离菌核和菌丝进行培养，得母种。

6.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于；

所述菌丝体的培养、提纯、复壮培养基的组成为马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖15g、红糖15g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.75g、维生素B11g,,蛋白胨5g、水1000mi（松木屑汁），其制备方法：包括下述步骤：（1）将马铃薯去皮，清选干净，切成薄片，放入锅中煮沸，煮到熟而不烂的程度，筛网过滤，制得马铃薯汁，调节其pH值5.5-6.5；（2）在制得的马铃薯汁中加入培养基组成中的其它成份，加热溶解后，分装入试管后，在0.15公斤压力下高温灭菌30分钟，取出，冷却，将其制成斜面培养基，在无菌条件下接入茯苓母种；得提纯母种。

7.根据权利要求4所述的茯苓速生菌种培养方法，其特征在于；

所得茯苓速生菌种提纯种，将其制作成液体菌种，包括如下步骤：在培养液中接入茯苓母种，于28－30℃条件下培养96－100小时，得到一级种子液，所述一级培养基的配方以重量百分含量计为：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.75g、维生素B10.75g,,蛋白胨5g、水1000mi，得液体种。

8.根据权利要求5所述的茯苓速生菌种培养方法所得茯苓速生菌种液体种，其特征在于，所述方法、包括如下步骤：

（1）一级培养：在液体培养液中接入所述母种，培养7天，作为一级种子液；

（2）二级培养：将所述第一代种子液按培养基体积10％-15％的接种量接入液体培养基中，培养7天，作为二级种子液；

根据权利要求6所述的茯苓速生菌种培养方法所得茯苓速生菌种三级种，其特征在于所述方法、包括如下步骤：

选用新鲜、干燥、无杂质污染的松段木，其标准：长15-18mm、直径6-8mm，经太阳暴晒干燥后，要求严格灭菌、消毒，在无菌室无菌接种二级液体种；接种量为30－40%，培育温度为28－30℃，培育时间为4-8天，待菌丝长满后，得茯苓速生菌种。