[发明专利]GP73胶乳增强免疫比浊法体外定量测定诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用胶乳增强免疫比浊方法测定人体血清中GP73(高尔基体糖蛋白-73，GolgiProtein73)含量的试剂盒，属于医学免疫体外诊断领域。

背景技术

GP73(高尔基体糖蛋白-73，GolgiProtein73)又称Ⅱ型高尔基体膜蛋白，TypeⅡGolgimembraneprotein，Golph2)，因Golph2多克隆抗血清能够特异性识别人类上皮细胞裂解物中大小为7.3×104的蛋白分子，故又将这种蛋白称为GP73。GP73是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白，分子量为45KDa，但血清中GP73经过大量糖基化，其分子量在血清检测中显示约为73KDa.。由于GP73富含酸性氨基酸(5.5％天冬氨酸，12.2％谷氨酸)，其等电点PI＝4.72。GP73有很强的亲水性，但有疏水的氨基酸。

2000年Kladney研究表明，在正常的人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞表达很少甚至不表达。肝细胞受到病毒感染后可引起GP73的表达上调。2005年Block等发现，在肝癌患者血清中GP73水平显着升高。在一项研究中，与肝硬化患者相比，144例肝癌患者的血清GP73水平显着升高。GP73诊断肝癌的敏感性为69％，特异性为75％.对于早期肝癌(T1：单个结节，直径<2cm及T2：单个结节，直径位于2cm～5cm之间或小于三个结节，每个直径<3cm)的诊断，GP73的敏感性(62％)显着优于甲胎蛋白(AFP)(25％)。而且，AFP水平低于20ng/mL的肝癌患者中，有57％(32/56)的人GP73水平显着升高。从而提示，肝癌患者血清中GP73水平明显增高，并且对于诊断早期肝癌，GP73可能优于AFP。因此GP73可能成为更好的诊断肝癌尤其是早期肝癌的血清标志物。

目前市面上销售的GP73检测试剂盒都是ELISA法的检测试剂盒，其测定原理是采用双抗体夹心法定量检测血清样本中GP73的含量。该试剂盒中酶标板上预包被GP73单抗，与样本中GP73反应结合，再加入HRP标记GP73多抗，用TMB底物显色，显色强度与样品中GP73的浓度呈正比。通过酶标仪检测样本的吸光度值，按已知GP73含量的标准品，计算出样品中GP73的含量。ELISA试剂盒无法在全自动生化仪上使用，需要耗费大量人力，所以开发胶乳增强免疫比浊法试剂盒是一个很好的方向。

发明内容

本发明提供一种利用胶乳增强免疫比浊方法测定人体血清中GP73含量的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)GP73R1试剂；(2)GP73R2试剂；(3)GP73校准品。

为实现上述目的，本发明的技术方案包括：

(1)GP73R1试剂，是一种为试剂盒提供适当反应环境、使抗原保持天然构象并控制反应达到终点的时间和速率的试剂，包含电解质、促凝剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液。

(2)GP73R2试剂，是一种含有抗人GP73多克隆抗体包被胶乳颗粒的均一的乳白色液体，包含抗人GP73多克隆抗体包被胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液。

(3)GP73校准品，用来与样本比较进行结果计算，包含防腐剂、电解质、稳定剂、GP73抗原及缓冲液。

在本发明的一实施方案中，胶乳比浊法测定人体血清中GP73含量的试剂盒包括：GP73R1试剂、GP73R2试剂和GP73校准品，其中：

所述GP73R1试剂的主要成分为：0.1％-5.0％电解质、2％-6％促凝剂、0.1％-1％稳定剂、0.1％-1.0％表面活性剂、0.05％-0.1％防腐剂及pH7-9、浓度范围为10-100mmol/L的缓冲液；

所述GP73R2试剂的主要成分为抗人GP73多克隆抗体包被胶乳颗粒和占其质量百分比为：0.1％-5.0％电解质、0.5％-5％稳定剂、0.1％-1.0％表面活性剂、0.05％-0.1％防腐剂及pH7-9、浓度范围为10-100mmol/L的缓冲液；

所述GP73校准品的主要成分为：0.1％-5.0％电解质、0.5％-5％稳定剂、0.05％-0.1％防腐剂、0-500ng/mlGP73抗原及溶解在预处理的人血清基质中、pH6.5-8.0、浓度为10-100mmol/L的缓冲液。

本发明所用的多克隆抗体选自绵羊或兔子等健康的免疫动物，此类抗体效价高成本低，具有一定优势。