[发明专利]一种经济有效的细菌细胞破碎方法

权利要求书

1.一种经济有效的细菌细胞破碎方法，其特征按下列步骤进行：

（1）收集细胞细菌细胞沉淀物：将待破碎的细菌细胞培养液均分为N份分装于N个相等型号的EP管中（事先洗净灭菌），放于4℃低温高速离心机中，对称平衡，8000rpm-16000rpm离心1-5min，去除上清液，收集细胞沉淀物；

（2）溶菌酶处理：每管中分别加入适量溶液A（3.0mM咪唑，0.5MNaCl，20mMTris-HCl，pH=7.9），使细胞体充分重悬后，各加入溶菌酶(50mg/mL)充分混合，至终浓度为1mg/mL-2mg/Ml，冰浴0.5h-1h，或4℃过夜；

（3）反复冻融：将上述EP管放在液氮中，迅速使其凝固，待其完全凝固后，取出EP管放在30℃水浴锅中，使其充分溶解，且注意溶解时要不断摇晃EP管，避免EP管管壁温度太高，而使蛋白质高温变性；

（4）重复步骤(3)，使细胞反复冻融5-7次；待溶液呈粘稠状时，停止冻融；

根据所需提取的内含物的性质不同，对上述细胞破碎液进行不同处理，如需获得蛋白提取液，下一步可对此溶液进行离心处理，去除沉淀。

2.根据权利要求1（1）待破碎的细菌细胞溶液体积没有限制，但是这些溶液要均分在相同EP管中，EP管的数量以便于离心配平为准。

3.根据权利要求1（2）加入溶液A的体积要大于或等于待破碎的细菌细胞溶液总体积的1/20，同时溶液A要现配现用，破碎效果更好更彻底。

4.根据权利要求1（3）使用液氮冷冻溶液，能够迅速降低液体温度，每次冷冻时间不超过2分钟；接着在30℃水浴锅中进行融解，边融解边摇晃EP管，可避免局部温度过高，对蛋白造成的不利影响；用此方法破碎细胞可实现对大批材料的同时处理，避免细胞破碎仪这类仪器对处理材料体积的限制，以及超声波这类仪器对设置条件的限制等。

5.根据权利要求1（4）反复冻融的次数以液体呈现大量粘稠状为根据，停止冻融；一般反复冻融5-7次时，即可完成操作。