[发明专利]一株产α-L-鼠李糖苷酶的菌株及采用该菌株发酵生产α-L-鼠李糖苷酶的方法

权利要求书

1.一株产α-L-鼠李糖苷酶的菌株，其分类命名为互隔交链孢（Alternariaalternata）SK37.002，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2015309。

2.根据权利要求1所述产α-L-鼠李糖苷酶的菌株，其特征在于该菌株的核糖体DNAITS序列如SEQIDNO.1所示。

3.用权利要求1或2所述产α-L-鼠李糖苷酶的菌株发酵生产α-L-鼠李糖苷酶的方法，其特征在于步骤为：以柚皮苷和蔗糖为碳源的发酵培养基中对互隔交链孢CCTCCNO：M2015309进行发酵，以得到含有α-L-鼠李糖苷酶的菌体；然后对含α-L-鼠李糖苷酶的菌体进行破碎，最后对α-L-鼠李糖苷酶进行分离纯化。

4.根据权利要求3所述用产α-L-鼠李糖苷酶的菌株发酵生产α-L-鼠李糖苷酶的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）α-L-鼠李糖苷酶的制备：对互隔交链孢CCTCCNO：M2015309，进行斜面、种子、发酵三级培养生产，培养基各组分以g/L计：

a、斜面培养：采用PDA培养基：马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15~20，pH自然，使用去离子水配制，115℃灭菌30min；斜面培养条件为：培养温度25~35℃，培养时间3~8天；

b、种子培养：种子培养基：NaNO₃2，K₂HPO₄1，KCl0.5，MgSO₄0.5，FeSO₄0.1，蔗糖30，pH自然，使用去离子水配制，121℃灭菌20min；种子培养条件：于30℃、200rpm摇床培养12h；

c、发酵培养：发酵培养基：柚皮苷1，蔗糖5，NaNO₃5，K₂HPO₄0.8，CaCl0.7，KCl0.5，MgSO₄0.5，FeSO₄0.1，自然pH；使用去离子水配制，121℃灭菌20min；发酵条件：接种量5%、转速200rpm、温度30℃的条件下在发酵培养基中发酵4-5d，得到含α-L-鼠李糖苷酶的菌体；

（2）α-L-鼠李糖苷酶的纯化：对步骤（1）所得含α-L-鼠李糖苷酶的菌体进行菌体过滤、洗涤，在缓冲液中溶解后采用10cm探头超声破碎10min，10000r/min离心10min，20%~70%硫酸铵分离沉淀目的蛋白，缓冲液透析，DEAE-FF16/10离子交换层析，Superdex75凝胶过滤层析后，最后将得到的液体冷冻干燥即得α-L-鼠李糖苷酶。