[发明专利]一种变换核酸基因型的方法

权利要求书

1.一种变换核酸基因型的方法，其特征在于，其包含如下步骤：

(1)提供含有不同等位基因型的混合样本，其包括目的基因型核酸片段和特定基因型核酸片段；

(2)在步骤(1)的混合样本中，加入对其中一种特定基因型核酸片段进行选择性破坏的耐高温核酸内切酶；所述选择性破坏特定基因型核酸片段为所述核酸内切酶介导的破坏特定序列的化学反应，所述核酸内切酶选自天然的核酸内切酶，或者是基因工程核酸内切酶；

(3)在所述混合样本中加入用于扩增目的基因型核酸片段的引物和DNA聚合酶，利用被选择性破坏后的断裂片段以其他等位基因的所述目的基因型核酸片段作为模板进行DNA聚合酶介导的PCR反应；

其中，在步骤(2)的选择性破坏产生的断裂片段为以下情形(A)时，在步骤(3)中加入的所述DNA聚合酶为具有三末端向五末端外切功能的高保真DNA聚合酶：(A)断裂片段三末端具有与目的基因型核酸片段不配对的碱基；

在步骤(2)的选择性破坏产生的断裂片段为以下情形(B)时，在步骤(3)中加入的DNA聚合酶为不具有三末端向五末端外切功能的DNA聚合酶：(B)断裂片段三末端不具有与目的基因型核酸片段不配对的碱基，此时，断裂片段上与目的基因型核酸不配对的碱基位于断裂片段的五末端；

并且其中，步骤(2)的对其中一种特定基因型核酸片段进行选择性破坏和步骤(3)的PCR反应中的核酸延伸反应重复进行25-55次。

2.根据权利要求1所述的变换核酸基因型的方法，其特征在于，在步骤(2)中的所述耐高温核酸内切酶为耐95℃的核酸内切酶。

3.根据权利要求1所述的变换核酸基因型的方法，其特征在于，在步骤(3)的进行所述PCR反应的体系中还加入包含有目的基因型核酸片段的突变碱基的寡核苷酸单链，作为引物待测模板进行反应。